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目的：研究家兔肺缺血再灌注损伤时Toll样受体4(TLR4)信号转导通路变化及虎杖甙(PD)对其影响.
方法：复制在体肺缺血再灌注损伤模型.健康日本大耳白兔30只,随机分为对照(C)组、缺血再灌注(IR)组、PD组.实验结束取部分左肺组织测湿/干重比(W/D);鲎试剂试管法检测血浆内毒素(ET)含量;过氧化氢还原法检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;免疫组化法检测肺组织TLR4、核因子-kBp65(NF-kBp65)和热休克蛋白70(HSP70)的蛋白表达;原位杂交法检测肺组织细胞间粘附分子-1(ICAM-1)RNA表达;光镜、电镜下观察肺组织形态结构变化,并测定肺损伤组织学定量评价指标(IQA).
结果：
1.IR组W/D、IQA、MPO值显著高于C组(均P<0.01),PD组上述指标明显低于IR组,但仍高于C组(均P<0.01).
2.C组、IR组与PD组三组间血浆ET无显著差异(均P>0.05).
3.IR组肺组织TLR4、NF-kBp65、HSP70蛋白及ICAM-1mRNA表达较C组显著升高(均P<0.01),PD组上述蛋白和基因表达明显低于IR组,但仍高于C组(均P<0.01).
4.肺组织MPO与肺组织W/D、IQA之间存在显著正相关(r分别=0.897,0.964,均P<0.01);肺组织MPO与肺组织TLR4、NF-kBp65、HSP70蛋白、ICAM-1mRNA表达之间存在显著正相关(r分别=0.953,0.963,0.970,0.935,均.P<0.01);肺组织TLR4与肺组织W/D、IQA之间存在显著正相关(r=0.909,0.966,均P<0.01):肺组织TLR4与NF-kBp65、HSP70蛋白、ICAM-1mRNA表达之间存在显著正相关(r=0.976,0.981,0.919,均P<0.01).
5.肺组织病理学变化:①光学显微镜显示:IR组可见肺间质增宽水肿,炎症细胞浸润,肺泡内可见较多红细胞渗出,损伤明显;PD组肺间质水肿程度减轻,炎症细胞浸润减少,肺泡也较完整.②透射电镜显示:IR组肺泡II型上皮细胞微绒毛脱落,板层小体疏松、排空,胞浆水肿,部分浓缩,核固缩;血管内皮细胞水肿,线粒体空泡样变等.PD组肺组织上述损伤明显减轻.
结论：
1.TLR4.信号转导通路上调致中性粒细胞在肺组织聚集参与肺缺血再灌注损伤的发生、发展.
2.肺缺血再灌注损伤过程中HSP70合成增加,作为内源性配体之一上调TLR4,续可能通过激活NF-κB,进而诱导ICAM-1的转录和分泌.
3.PD可能通过下调TLR4信号转导途径,减少中性粒细胞浸润而减轻肺缺血再灌注损伤.