【摘 要】
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第一部分:阿魏酸促进骨肉瘤细胞的凋亡目的:探索阿魏酸在SaOS-2和MG63骨肉瘤细胞系中促进凋亡和抗肿瘤活性及其潜在的机制。方法:选取SaOS-2和MG63骨肉瘤细胞系进行实验,分别
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第一部分:阿魏酸促进骨肉瘤细胞的凋亡目的:探索阿魏酸在SaOS-2和MG63骨肉瘤细胞系中促进凋亡和抗肿瘤活性及其潜在的机制。方法:选取SaOS-2和MG63骨肉瘤细胞系进行实验,分别将其置于不同浓度(0 μM,10μM,20μM,40μM)的阿魏酸溶液中,在37℃下培养72小时。应用MTT方法检测培养的骨肉瘤细胞存活率;用annexinV和碘化丙啶处理培养后的细胞,通过流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡情况;运用western blot技术检测培养的骨肉瘤细胞中凋亡蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax含量;运用qPCR技术检测培养的骨肉瘤细胞中Bcl-2 mRNA和Bax mRNA的表达量。结果:阿魏酸培养的骨肉瘤细胞的存活率以浓度依赖性关系显著性降低(P<0.01)。培养后凋亡的骨肉瘤细胞数随阿魏酸的浓度的增高而相应增多。procaspase-3蛋白含量、Bcl-2mRNA和蛋白含量显著性降低(P<0.05),与此同时,caspase-3蛋白含量、Bax mRNA和蛋白含量显著性升高(P<0.05),且这些变化的趋势呈现明显的剂量依赖性关系(P<0.05)。阿魏酸对SaOS-2骨肉瘤细胞的作用与对MG63骨肉瘤细胞的作用非常相似(P>0.05)。结论:阿魏酸可能通过激活caspase-3和Bax的基因表达并下调Bcl-2基因表达来促进凋亡,从而显著性降低骨肉瘤细胞的存活率。第二部分:阿魏酸抑制骨肉瘤细胞的血管化目的:探索阿魏酸对骨肉瘤细胞系的血管化的影响,从而抑制骨肉瘤细胞的活力。方法:将SaOS骨肉瘤细胞分别置于40 μM或0 μM的阿魏酸溶液中培养72小时,检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的免疫组织化学特征,运用qPCR技术定量VEGF mRNA的相对表达量,应用Western blot技术检测VEGF蛋白含量。另将阿魏酸培养的SaOS骨肉瘤细胞接种到Balb/C裸鼠皮下,生成的移植瘤组织切片进行HE染色、VEGF免疫组织化学和CD34免疫组织化学检查以及肿瘤微血管计数。结果:在体外实验中,阿魏酸组中VEGF免疫组织化学斑点、VEGF mRNA的相对表达量和VEGF蛋白含量均较对照组显著性减少。在体内实验中,肿瘤组织大体形态学观察见阿魏酸组细胞的异型性不明显且新生的血管系统稀少,免疫组织化学检测结果显示阿魏酸组VEGF的免疫组织化学斑点和CD34的免疫组织化学斑点均明显稀少于对照组,且阿魏酸组的微血管计数(7.70±1.55)也较对照组(18.22±3.31)显著性减少(P<0.05)。结论:阿魏酸能显著性抑制骨肉瘤的血管化,从而对骨肉瘤产生抑制作用,它有可能成为一种新颖且有良好应用前景的治疗骨肉瘤的天然药物。
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