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[目的]金黄色葡萄球菌是最重要的细菌病原体之一,可引起广泛的临床疾病,包括皮肤和软组织感染、菌血症、脓毒血症和毒性休克综合征(TSS)。TSS属于严重的脓毒血症,可引起多器官功能障碍综合征(MODS)。研究表明,脓毒血症的过度炎症反应和凝血功能障碍是MODS发生和发展的病理生理基础,其中活化的血小板是血栓形成与炎症之间的桥梁,在脓毒血症的发生发展中起着重要作用。金黄色葡萄球菌能够分泌毒性休克综合征毒素-1(TSST-1),在临床病例中,TSST-1参与广泛的T淋巴细胞活化,可直接损伤Kupffer细胞。这些变化被认为是低血压和休克的发病机制,最终导致死亡。而血小板在脓毒血症的发生、发展中起着重要作用。目前我们尚不清楚TSST-1能否引起血小板的活化与凋亡,因此我们探究了tst阳性金黄色葡萄球菌与tst阴性金黄色葡萄球菌对血小板作用的差异。[方法]实验使用的金黄色葡萄球菌来自苏州大学附属第二医院微生物实验室菌种库,应用聚合酶链反应(PCR)技术以及基因组序列测定筛选出的,除tst基因外具有相似基因型的两种金黄色葡萄球菌。该实验分为体外实验和体内实验。在体外实验中使用的血小板为洗涤血小板。从健康志愿者中采集空腹静脉全血,分离得到洗涤血小板和富含血小板血浆(Platelet rich plasma,PRP),将血小板的浓度调整至3× 108/ml。洗涤血小板分别与tst阳性和tst阴性金黄色葡萄球菌以1:20的比例,37℃孵育1.5小时。使用Western blot检测血小板中凋亡蛋白(Bak,Bcl-XL和caspase-3)的表达。使用流式细胞仪检测血小板线粒体跨膜电位(Mitochondrial inner transmembrane potential,△ψm)变化,磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)外翻程度,血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa复合物(PAC-1)受体暴露情况和CD62p(P-选择素)的表达。另一部分洗涤血小板分别与等量的两种金黄色葡萄球菌液体培养基37℃孵育1.5小时,使用流式细胞仪检测血小板的△ψm,PS暴露,PAC-1以及CD62p 阳性表达。给6-7周的雌性野生小鼠眼球后静脉注射两种金黄色葡萄球菌,之后在不同时间点采集小鼠球后静脉血,使用血液分析仪检测小鼠静脉血内血小板、白细胞、红细胞以及血红蛋白等数值,并同时统计各时间点的菌落数,观察其随时间的变化,经过统计学分析,得到有意义的时间点,并使用流式细胞仪检测此时血小板的△ψm,PS暴露以及CD62p阳性率。同时将剩余血清检测炎症因子(TNF-α、IL-6、MCP-1和IL-10)的变化。注射细菌三天后统计小鼠的生存率。[结果]tst阳性金黄色葡萄球菌以及其培养液可以使血小板的△ψm去极化,PS外翻,PAC-1受体暴露且CD62p表达,且高于tst阴性金黄色葡萄球菌对照组。tst 阳性金黄色葡萄球菌促使血小板的凋亡蛋白(Bak)升高,抗凋亡蛋白(Bcl-XL)降低。注射tst阳性金黄色葡萄球菌的小鼠死亡率升高,注射后6小时检测的血小板绝对值,白细胞绝对值,红细胞绝对值,血红蛋白浓度均显著下降,且此时的血小板CD62p表达,PS外翻程度均高于tst阴性组。TNF-α、IL-6和MCP-1在注射细菌两小时后均有不同程度的升高,但细菌组之间没有统计学差异。[结论]这些数据表明:tst阳性金黄色葡萄球菌及其培养液能够使血小板凋亡及活化更明显,且感染tst阳性金黄色葡萄球菌的小鼠死亡率更高。这些发现为脓毒血症合并血小板减少症患者的诊断和治疗提供了新的思路。