合欢对大鼠脑胶质瘤C6细胞株的增殖抑制与凋亡诱导作用

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脑神经胶质瘤(glioma)是发生于神经元外胚层的肿瘤,占颅内肿瘤的50%左右,是颅内最常见的原发性恶性脑肿瘤,其中位生存期仅9-12个月。世界卫生组织(WHO)1998年公布的按死亡率顺序排位,恶性胶质瘤是34岁以下肿瘤患者的第2位死亡原因,是35-54岁患者的第3位死亡原因。脑神经胶质瘤的生物学特征是呈浸润性生长,其恶性程度高,生长快,病程短,具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低等“三高一低”的特点,因此寻找有效的胶质瘤治疗方案及方法具有重要的意义。在临床实践中,一方面由于神经胶质瘤多发生于脑的重要功能区及其附近,与正常脑组织没有明显界限,手术往往难以将肿瘤全部切除或根本无法切除。另一方面,放疗常可使肿瘤及病灶周围的正常组织受到放射线的损伤。因此寻找安全、有效且毒副作用小的治疗神经胶质瘤的药物就显得十分重要。中医中药由于其独特的优势,近年来被广泛应用于癌症的预防和治疗。本文分别对半枝莲、篇蓄、合欢花、合欢皮、柴胡、天南星、蛇舌草、旋覆花、栀子9种中草药进行了水提、真空抽滤、减压浓缩,然后将浓缩后的组分进行冷冻干燥,即得它们的水提物。以得到的干物质对大鼠脑胶质瘤C6细胞株进行细胞增殖活性检测,结果显示:上述粗提物中,仅合欢花、合欢皮两种水提物能较好地抑制C6细胞的增殖。基于上述实验事实,我们进一步研究了合欢花、合欢皮两种水提物对C6细胞株的凋亡诱导作用及对细胞周期分布的影响,并对合欢皮粗提物进行了萃取分离,以寻找有效抗癌组分。所得结论如下:1.合欢花、合欢皮两种药物的水提物均可抑制C6细胞的增殖,且对C6细胞的增殖抑制作用具有量效和时效依赖关系。合欢花水提物在24h、48h、72h时,对C6细胞的半数抑制率(IC50)分别为:305μg/mL、145μg/mL、15μg/mL;合欢皮水提物在24h、48h、72h时,对C6细胞的半数抑制率(IC50)分别为:265μg/mL、195μg/mL、95μg/mL。2.合欢花、合欢皮两种药物的水提物均可诱导C6细胞发生细胞凋亡。与对照组细胞相比,浓度分别是200μg/mL、2501μg/mL、300μg/mL的合欢花水提物处理C6细胞24h后,细胞凋亡率分别增加了1.4%、3.4%、13.3%;浓度分别是200μg/mL250μg/mL的合欢皮水提物处理C6细胞24h后,细胞凋亡率分别增加了2.1%、13.7%。3.合欢花、合欢皮两种药物的水提物均可使C6细胞发生S期阻滞。浓度是300μg/mL、400μg/mL的合欢花水提物处理C6细胞24h后,S期细胞比例由对照组的32.169%分别增加到46.990%、49.623%;浓度是300μg/mL、400μg/mL的合欢皮水提物处理C6细胞24h后,S期细胞比例由对照组的30.107%分别增加到39.910%、45.395%。4.依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇对合欢皮粗提物进行了萃取分离,分别将冷冻干燥后的合欢皮粗提物、石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相、正丁醇相以及残留水相6类组分对C6细胞进行细胞增殖活性检测,检测结果显示:仅残留水相对C6细胞的增殖无抑制作用;其余几相均可抑制C6细胞的增殖,其抑制作用由强到弱的顺序依次为:正丁醇相、粗提物、石油醚相、氯仿相、乙酸乙酯相。
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