目的:在众多癌症中往往存在着多种受体酪氨酸激酶通路的异常激活,各通路之间存在着冗余机制,即其中一个信号通路被抑制时会导致另一个或者多个通路的信号激活,因而单一靶点药物治疗肿瘤效果不佳。前期研究表明本实验室制备的msFGFR2c能有效的抑制FGFR信号通路,在EGF诱导的情况下,msFGFR2c能同时抑制EGFR的磷酸化,但其具体机制还不清楚,故探索其作用机制为开发双靶点或多靶点药物具有重要意义。方法:运用原核生物表达系统构建表达EGFR胞外段重组蛋白,CCK-8法检测其生物活性;WB检测msFGFR2c对DU145中EGFR磷酸化的抑制作用;Co-IP检测msFGFR2c与EGFR的相互作用;激光共聚焦检测msFGFR2c与EGFR的共定位情况;ITC检测msFGFR2c与EGFR的结合力。结果:CCK-8检测结果显示,重组表达的EGFR胞外段蛋白能抑制EGF对H1299诱导的增殖作用。WB结果显示msFGFR2c能明显抑制DU145细胞中EGFR的磷酸化作用。Co-IP结果显示msFGFR2c能够与EGFR相互结合。激光共聚焦结果显示msFGFR2c与膜上过表达的EGFR存在明显的共定位情况。ITC结果显示msFGFR2c与EGFR有直接相互作用,K=5.41E4M^-1。结论:本课题组构建表达的突变型FGFR2Ⅲc胞外段蛋白msFGFR2c,有望成为靶向（FGFR和EGFR）的双靶点抗肿瘤药物。