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目的:PD-1(Programmed death-1,程序性死亡分子1)是T淋巴细胞处于免疫抑制状态的标志,T淋巴细胞表面PD-1分子的过高表达会影响其增殖能力和杀伤活性。通过检测鼻咽癌肿瘤患者PBMC(peripheral blood mononuclear cell,外周血单个核细胞)中PD-1分子的表达情况,分析其与患者临床分期的相关性,探讨其作为评估鼻咽癌肿瘤患者临床预后的指标可行性;通过抽取鼻咽癌患者外周血培养三种淋巴细胞:NKT淋巴细胞、γδT淋巴细胞、NK淋巴细胞杀伤鼻咽癌细胞系CNE-1的杀伤作用比较,筛选出杀伤作用较强的淋巴细胞种类,讨论将PD-1单克隆抗体封闭不同种类具有杀伤作用的淋巴细胞表面上的PD-1分子是否对鼻咽癌细胞系杀伤作用产生不同影响。方法:用流式细胞仪检测53例鼻咽癌患者和58例健康人的PBMC表面PD-1的表达情况,分析PD-1分子的表达与CD3+CD8+细胞毒性T淋巴细胞和CD3+CD4+记忆性T细胞相关性以及临床分期的的相关性,对鼻咽癌患者的细胞免疫状态进行初步的评估,同时从鼻咽癌患者外周血分离PBMC细胞,利用GM-CSF、IL-4等细胞因子培养DC(Dendritic cell,树突状细胞),用α-Galcer、anti-CD3m Ab、IFN-γ、IL-2等细胞因子体外扩增培养γδT淋巴细胞,NK细胞,NKT淋巴细胞三种淋巴细胞,将γδT淋巴细胞以及NKT淋巴细胞与鼻咽癌肿瘤抗原预激的DC共孵育,最终发展为抗原预激特异性T细胞,利用无标记追踪法比较三种淋巴细胞杀伤鼻咽癌细胞株CNE-1的情况,筛选出杀伤作用较强的淋巴细胞,后加入抗PD-1单克隆抗体阻断T淋巴细胞表面PD-1分子的表达,检测阻断后T淋巴细胞的增殖情况和细胞表面PD-1分子的表达情况。最后用无标记追踪法检测比较杀伤能力最强的T淋巴细胞阻断前后对鼻咽癌细胞株CNE-1的特异性杀伤活性的差异。结果:(1)鼻咽癌患者PBMC中的PD-1的表达率明显高于健康人(P<0.0001),但与鼻咽癌临床分期没有明显的统计学差异。(2)PD-1的表达与CD3+CD8+CTL(cytotoxic lymphocyte,细胞毒性T淋巴细胞)以及CD45RO+CD62LˉTEM(effector memory T cell,效应记忆性T细胞)的含量呈负性相关(P<0.0001)。(3)无标记追踪法杀伤实验显示NKT淋巴细胞为三种淋巴细胞中杀伤鼻咽癌肿瘤细胞系CNE-1能力最强,NK淋巴细胞次之,γδT淋巴细胞最弱(P<0.05)(4)抗PD-1单克隆抗体对NKT淋巴细胞的增殖活性无明显影响(P>0.05),但NKT细胞表面PD-1的表达明显下降(P<0.0001)。(5)无标记追踪法杀伤实验显示:PD-1阻断组的NKT淋巴细胞对肿瘤细胞株CNE-1的杀伤活性高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)PD-1在鼻咽癌肿瘤患者PBMC中的平均表达率高于健康人PBMC中的表达,PD-1的高表达一定程度上反应了患者T淋巴细胞功能抑制的状态,通过流式细胞术检测鼻咽癌患者PBMC中PD-1的表达可以作为临床应用抗PD-1单克隆抗体治疗的评估指标。(2)PBMC中PD-1的表达与鼻咽癌患者分期并无统计学相关,并不能作为判断鼻咽癌患者预后的判断指标。(3)体外阻断过继性NKT淋巴细胞表面PD-1分子的高表达可以有效提高其体外杀伤鼻咽癌细胞系CNE-1能力,抗PD-1单克隆抗体与过继性NKT细胞联合应用有望能成为鼻咽癌免疫治疗的新途径。