论文部分内容阅读
目的:本研究通过基因芯片技术探讨广州市花都区2型糖尿病外周血中circRNA的差异表达谱特征,并在人群中进一步验证circRNA表达水平与2型糖尿病发病之间的关联;通过分析表达差异的circRNA以及生化指标与2型糖尿病之间的相关性,探讨表达差异的circRNA作为2型糖尿病生物标志物的可能性;最后预测差异表达circRNA在2型糖尿病发病过程中的功能机制,为2型糖尿病的预防治疗提供依据。方法:本研究依据2019年1月至10月份广州市花都区18周岁以上居民的现场调查。采用个体匹配的病例对照研究设计,共纳入了107名2型糖尿病患者与以性别相同,年龄差±5岁为匹配条件筛选的107名健康参照者为研究对象。第一阶段收集4名2型糖尿病患者与4名健康参照组的外周血,通过circRNA基因芯片技术筛选两组间circRNA差异表达谱。第二阶段收集103名2型糖尿病与103名健康参照者的全血样本以及人口学、实验室检查等信息。circRNA差异表达谱中筛选的4个circRNA通过实时荧光定量PCR技术进行定量检测,采用受试者工作曲线(ROC曲线)评价目标circRNA在2型糖尿病中的诊断价值,采用多因素条件Logistic回归模型分析目标circRNA与生活行为因素对2型糖尿病患病风险的影响,采用相关性分析探讨目标circRNA与生化指标之间的相关性。采用GO分析预测目标circRNA在糖尿病发病过程中可能产生的作用功能,使用KEGG通路分析预测目标circRNA在糖尿病发病过程中可能参与的信号通路。使用软件Epidata3.1建立的数据库对收集的问卷数据进行交叉双录入,统计分析方法采用软件SAS9.4与R3.6.0完成。结果:1.circRNA基因芯片结果显示:初步建立了2型糖尿病组与健康对照组的circRNA差异表达谱,共发现有86个circRNA在2型糖尿病中表达有差异。有70个circRNA表达呈现上调,16个circRNA表达为下调。2.实时荧光定量PCR验证结果显示:初筛的4个显著差异circRNA在扩大人群验证中,只有has＿circ＿0071106在两组之间的表达差异有统计学意义,且has＿circ＿0071106在糖尿病组中的表达为上调,与circRNA芯片结果一致。在多因素条件Logistic回归模型中,校正职业、血脂等混杂因素后,高表达水平的has＿circ＿0071106患2型糖尿病风险是低表达水平患病风险的2.819倍(95%CI:1.415～5.616)。相关性分析中显示has＿circ＿0071106的表达水平与血糖、低密度脂蛋白、谷草转氨酶这三者存在着相关关系(P<0.05),血糖值越大或低密度脂蛋白值越大时,has＿circ＿0071106的表达水平值也越高,谷草转氨酶浓度越大时,has＿circ＿0071106的表达水平越低。调整其他因素后ROC曲线分析结果显示,has＿circ＿0071106曲线下面积AUC为0.690,灵敏度为62.1%,特异度为69.9%,提示has＿circ＿0071106可考虑作为2型糖尿病诊断的生物标志物。3.功能预测分析结果显示:与has＿circ＿0071106相结合的5个miRNA为hsa-miR-6830-3p、hsa-miR-4743-3p、hsa-miR-2682-3p、hsa-miR-1206、hsa-miR-29a-5p。GO功能分析发现差异表达的circRNA参与蛋白结合或调控基因的转录等生物过程,而KEGG结果预测到差异表达circRNA参与调控胰岛素信号转导的MAPK信号通路。结论:广州市花都区2型糖尿病与健康人群的外周血中存在着circRNA差异表达谱,has＿circ＿0071106可考虑作为2型糖尿病诊断的生物标志物,可能参与到hsa-miR-29a-5p调控糖尿病的通路中,也可能参与蛋白质结合或调控基因转录的生物过程,还可能参与糖尿病发病有关的MAPK信号通路。