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目的：为了应用PCR-DHPLC技术对莱姆病螺旋体进行准确、快速、高通量的分型检测；为了后续制备胶体金试纸，进行现场快速诊断，对致病性伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(Outer surface protein,OspA)进行原核表达，为莱姆病螺旋体的快速检测做准备工作。方法：以世界范围内常见的3种莱姆病螺旋体致病菌株（阿氏疏螺旋体、伯氏疏螺旋体、伽氏疏螺旋体）为研究对象。应用Genbank设计种属特异型基因序列OspC通用引物，应用PCR方法扩增3种致病菌的特异序列，联用DHPLC对扩增片段进行分型检测。此过程中进行PCR-DHPLC参数的优化，应用48株非螺旋体致病性菌株验证PCR-DHPLC的灵敏度、特异性，并将此方法应用到实际样品检测中；为了应用间接酶联免疫法检测抗体，本研究表达OspA蛋白，为后续制备胶体金试纸做准备。首先通过查找相关文献，选取在伯氏疏螺旋体感染中大量表达的OspA，针对其序列设计引物,在两端加入酶切位点NdeI/XhoI，获取带有酶切位点的目的基因序列。双酶切后联入带有His标签pET-28b载体，将构建成功的重组表达载体转入BL21(DE3)表达菌株。通过改变诱导剂浓度、诱导时间、诱导温度，确定重组融合蛋白的最佳表达条件，分别选取诱导剂IPTG的浓度0.3mM、0.5mM、0.7mM，诱导时间0h、1h、2h、3h、4h、5h，诱导温度25℃、30℃、37℃，应用超声破碎、6M盐酸胍溶解、SDS-PAGE鉴定pET-28b-rOspA蛋白表达形式，应用Western Blotting鉴定pET-28b-rOspA融合蛋白的正确性和特异性。通过镍柱纯化所获得融合蛋白，改变洗脱液的浓度以达到最优的洗脱目的。结果：应用特异性通用引物扩增OspC产物片段，长度分别为633bp、630bp、630bp。测序后，通过比对，扩增序列完全正确；将扩增好的片段无需其他处理可直接上样于DHPLC中，结果表明，在部分变性条件下55.8℃时，能通过DHPLC将3种螺旋体致病菌进行区分。从而各自出现了特异性的分离图谱，可以很明显地从检测图谱上区分3种莱姆病螺旋体致病菌种；通过PCR-DHPLC分型检测方法，建立莱姆病致病菌株标准图谱，PCR-DHPLC方法灵敏度在核酸水平上达0.01pg/μL，具有良好特异性。成功构建重组伯氏疏螺旋体pET-28b-rOspA表达载体，经测序验证，转入BL21(DE3)，经过IPTG诱导，确定最佳表达条件，即IPTG诱导浓度为0.5mM、温度为37℃、诱导时间为4h。通过SDS-PAGE确定其为包涵体表达，经Western blotting验证，经镍柱纯化，获得纯度较好OspA蛋白。结论：本研究成功建立3种莱姆病螺旋体致病菌PCR-DHPLC标准图谱；通过构建重组pET-28b-rOspA质粒，表达纯化后，获得纯度较好OspA蛋白，为后续制备莱姆病螺旋体检测试纸奠定了基础。