【摘 要】
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本实验克隆得到克氏原螯虾MIH、EcR和RXR基因的全长cDNA序列,并用相关生物信息学方法研究三个基因的基因序列、功能结构、理化性质。运用荧光定量PCR技术研究了上述基因在克
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本实验克隆得到克氏原螯虾MIH、EcR和RXR基因的全长cDNA序列,并用相关生物信息学方法研究三个基因的基因序列、功能结构、理化性质。运用荧光定量PCR技术研究了上述基因在克氏原螯虾不同组织及不同蜕皮阶段的表达情况。结果显示PcMIH只在眼柄中表达,PcEcR和PcRXR在所检测的眼柄、肝胰腺、卵巢、肌肉、心脏、鳃和脑中均有表达,且两者的组织表达模式呈现出相似的结果,都在鳃和肝胰腺中检测到大量表达。眼柄中PcMIH的表达量从蜕皮后期开始上升,在蜕皮间期达到最大,在整个蜕皮前期呈现下降的趋势。PcEcR在眼柄、肝胰腺和肌肉中的表达从蜕皮后期开始上升,到蜕皮前期的早期达到最大,而后表达下调,而在鳃中则是从蜕皮后期开始上升,在蜕皮间期达到最大,在整个蜕皮前期呈现下降的趋势。PcRXR在所检测的眼柄、肝胰腺、肌肉和鳃中呈现一致的趋势,在蜕皮后期表达最多,而后一直呈现下降的趋势。眼柄切除实验发现不论是单侧还是双侧切除眼柄,PcEcR表达都先呈现出上升的趋势,而后下降。PcRXR在鳃中的表达也是先上升后下降,这说明PcMIH能够抑制PcEcR和PcRXR的表达。而PcRXR在肝胰腺中一直呈现上升的趋势可能是因为肝胰腺是卵黄蛋白原的产生场所,切除眼柄能够解除卵黄抑制激素的抑制作用,而RXR与卵黄蛋白的表达相关。RNA干扰实验表明不同的组织对干扰的敏感程度不同,注射RXR基因的双链RNA后PcEcR的表达量明显下降,这也证明了 EcR和RXR的协同关系。而PcMIH的表达也明显下降,其具体原因尚不明确,需要更深入的实验来探究。
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