本研究采用噬菌体表面显示技术克隆抗CD20抗体轻、重链可变区基因，构建嵌合抗CD20抗体及其Fab’片段，在哺乳动物细胞和大肠杆菌中进行表达；并对Fab’抗体片段的体内外抗瘤活性进行研究，以期将抗CD20抗体HI47推向B淋巴细胞瘤临床治疗应用。 一 轻重链可变区基因克隆及单链抗体库的构建 常规提取HI47杂交瘤细胞总RNA，利用RT-PCR法扩增抗体轻重链可变区基因片段，经Overlap PCR，利用连接链（G₄S）₃基因片段将抗体轻重链基因连接构成单链抗体（ScFv）基因，将ScFv基因重组到pCANTAB 5E载体上，构建抗CD20单链抗体噬菌体文库（约3×10⁶克隆），以表达CD20分子的Daudi细胞为靶抗原，经Panning，ELISA法筛选，获得多个具有CD20结合活性的克隆，对克隆6的基因序列进行序列测定分析，结果显示克隆6的基因序列完符合PDB文库中的抗体基本框架序列，是抗体基因序列。 二 嵌合抗体的构建表达及活性鉴定 利用PCR从表达载体pCANTAB 5Ecd20ScFv上扩增抗CD20抗体轻重链可变区基因，将VH、VL基因克隆到表达载体pYZF中，构建抗CD20抗体表达载体pYZFcd20，并在大肠杆菌中进行高效可溶性分泌表达Fab’，表达量可达3mg／ml。 本研究对嵌合抗CD20 Fab’片段的体内外活性进行了进一步的研究，竞争性免疫荧光抑制试验结果显示，Fab’特异结合Daudi细胞表面CD20，MTT法测定结果表明，Fab’表达产物抑制Daudi细胞、Raji细胞的生长，IC₅₀分别为69μg／ml、26μg／ml。³H掺入试验显示，嵌合抗CD20 Fab’不抑制Daudi细胞、Raji细胞DNA合成，但对RNA合成具有抑制作用。以50mg／kg剂量，四天一