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目的多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是血液系统第二大恶性肿瘤,主要以浆细胞克隆增殖为特征。硼替佐米（Bortezomib,BTZ）是目前临床上治疗MM的一线和二线用药,但随着BTZ的广泛应用,其耐药性也逐渐显现。三氟拉嗪（Trifluoperazine,TFP）主要用于治疗精神病,但近年来其抗癌作用逐渐被人们发现。我们通过体内外实验研究TFP协同BTZ诱导MM凋亡及相关机制。方法1.MM细胞株体外实验用不同浓度BTZ和TFP处理MM细胞株U266和MM.1S。CCK-8分别检测两种药物对U266和MM.1S细胞增殖抑制作用,周-塔氏（Chou-Talalay）方程确定联合用药浓度,流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测BTZ、TFP单药及联合用药作用后细胞周期分布及细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白、P38MAPK及NUPR1蛋白表达水平。用P38 MAPK激动剂预处理MM细胞后再用TFP处理,检测相关蛋白表达。2.荷瘤裸鼠体内实验建立裸鼠荷瘤模型。取1×10~7个MM.1S细胞接种于裸鼠颈背部,待裸鼠皮下肿瘤平均体积超过100~3后随机分为4组,分别使用BTZ（0.25 mg/kg/d 1、4、8、11）、TFP（5 mg/kg,隔天）、BTZ联合TFP（BTZ 0.25 mg/kg/d 1、4、8、11及TFP 5 mg/kg,隔天）以及等时等量生理盐水（Normal saline,NS）进行干预。给药结束后收获裸鼠皮下肿瘤及重要脏器,免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）及Western blot法检测皮下瘤组织增殖及凋亡相关蛋白Ki-67、P53、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax及Bcl-2的表达,苏木精-伊红染色检测裸鼠重要脏器组织形态结构。结果1.用不同浓度的BTZ和TFP处理U266和MM.1S细胞后,CCK-8实验发现BTZ及TFP单药均能抑制U266和MM.1S细胞活力,且呈浓度依赖性;BTZ、TFP对MM细胞株活力具有协同抑制作用。2.根据BTZ及TFP作用于U266和MM.1S细胞48 h的50值及预测协同抑制浓度,最终确定作用于U266细胞BTZ、TFP浓度分别为25 nmol/L及25μmol/L;作用于MM.1S细胞BTZ、TFP浓度分别为15nmol/L及20μmol/L。结果显示:25 nmol/L BTZ及25μmol/L TFP单独作用U266细胞48 h,G2/M期细胞比例分别为（9.40±1.29）%和（7.74±0.47）%,联合用药组G2/M期细胞比例为（16.76±2.76）%,对照组G2/M期细胞比例为（4.67±2.20）%。15 nmol/L BTZ及20μmol/L TFP作用MM.1S细胞48 h,G2/M期细胞比例分别为（18.84±2.58）%和（24.56±3.36）%,联合用药组G2/M期细胞比例为（35.58±3.50）%,对照组G2/M期细胞比例为（11.53±1.28）%。25 nmol/L BTZ及25μmol/L TFP单独及联合用药作用U266细胞48 h,BTZ及TFP均能诱导Cleaved Caspase-9,Bax蛋白水平上调及Bcl-2的下调（p＜0.05）;与BTZ单药组相比,联合用药组更为明显（p＜0.05）。15 nmol/L BTZ及20μmol/L TFP作用MM.1S细胞48 h,BTZ及TFP单药均能诱导Cleaved Caspase-9,Bax蛋白水平上调及Bcl-2的下调（p＜0.05）;与BTZ单药组相比,联合用药组更为明显（p＜0.05）。3.在MM.1S荷瘤裸鼠模型中,BTZ组肿瘤抑制率为65.38%,TFP组肿瘤抑制率为53.84%,联合用药组的肿瘤抑制率为87.18%（p＜0.05）。HE染色表明两种药物对裸鼠重要脏器组织无明显损伤,IHC及Western Blot检测发现,与BTZ及TFP单药组相比,联合用药组能够显著降低Ki-67和Bcl-2蛋白表达水平（p＜0.05）;联合用药组Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白表达水平较BTZ单药组显著升高（p＜0.05）。4.P38 MAPK激动剂（茴香霉素）能够逆转TFP诱导的MM细胞凋亡和NUPR1降低。结论1.BTZ及TFP均能抑制MM细胞株U266和MM.1S活力;BTZ、TFP对两种细胞株活力均有协同抑制作用（p＜0.05）。2.BTZ、TFP及BTZ联合TFP均能使U266和MM.1S细胞发生G2/M期阻滞,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax表达上调及Bcl-2表达下调,诱导MM细胞凋亡;联合用药组较BTZ、TFP单药组更明显（p＜0.05）。3.荷瘤裸鼠实验也表明,BTZ、TFP及BTZ联合TFP均可通过诱导MM.1S细胞凋亡,抑制肿瘤在体生长;联合用药组较BTZ、TFP单药组更明显（p＜0.05）。4.TFP可能部分通过p-P38 MAPK/NUPR1发挥抗多发性骨髓瘤作用。5.TFP增强BTZ抗MM疗效、机制以及临床应用有待进一步研究。