宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，居女性生殖系统恶性肿瘤的第一位。流行病学资料显示，人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈上皮内瘤和宫颈癌发生的主要原因。HPV依据其基因组核酸序列的变异分为不同的型。不同型是指病毒的DNA与其他任何已知的HPV的L1、E6和E7开放阅读框的DNA序列同源性小于90％；同源性达到90％-98％者为亚型；同源性大于98％者为型内变异株。已证实不同的HPV型别具有不同的致病能力。根据HPV亚型致病力大小或致癌危险性大小不同可将HPV分为低危型和高危型两大类。不同地区HPV的人群感染率不同，所携带的型别不同，与宫颈癌相关的型别也不尽相同。因此了解广东地区HPV的流行状况和型别分布将有助于本地区HPV感染的防控和疫苗的研制。目前，国内、外HPV研究主要集中在：疫苗及其防治技术的研究，HPV流行病学调查及分子诊断方法的研究，HPV变异株的分离鉴定、分子特征与致病关系的研究，HPV致病机理，HLA多态性与宫颈HPV感染及宫颈癌相关性研究等。为研究和制备适合广东地区人群的宫颈癌预防和治疗性疫苗，在进行疫苗研制和使用之前须了解广东地区HPV型和宫颈癌的流行病学以及致肿瘤性HPV型别的分布，故本研究从宫颈癌和HPV病毒株出发，着重从以下几个方面对广东地区宫颈病变人群中主要HPV型别及其基因多态性进行了研究。1．广东地区宫颈病变患者感染的HPV主要型别采用PCR直接测序法，对广东地区因宫颈病变就诊患者的宫颈脱落细胞标本1400份(其中HC-Ⅱ检测HPV DNA高危型阳性的标本1200份，阴性的标本200份)进行了HPV基因测序分型，以了解广东地区宫颈病变患者HPV主要型别。研究结果提示，在1200份HC-Ⅱ阳性的标本中共检测出HPV基因型(亚型)30型，检出率84.5％(1014／1200)；单一感染93％(943／1014)，双重以上混合感染7.0％(71／1014)。单一感染中各基因型及其检出率依次为HPV16型24.9％(235／943)、58型17.4％(164／943)、33型13.5％(127／943)、11型10.3％(97／943)、52型6.9％(65／943)、6型4.5％(42／943)、18型3.3％(31／943)、53型2.8％(26／943)、81型2.8％(26／943)、66型2.4％(23／943)、31型2.4％(23／943)、39型2.0％(19／943)、84型2.0％(19／943)、56型1.6％(15／943)、54型0.8％(8／943)、59型0.7％(7／943)；其它HPV CP8304：3例，HPV1、7、8、45、46、51、63、64、68、69、70、75、76各1例，共占1.7％(16／943)。在200份HC-Ⅱ阴性的标本中共检测出HPV基因型(亚型)3型，检出率4.5％(9／200)，各基因型及其检出率依次为HPV 58型2.0％(4／200)、16型1.5％(3／200)、33型1.0％(2／200)，无混合感染。本研究发现广东地区宫颈脱落细胞中有30种HPV亚型；其中有16种高危型HPV型别(16、58、33、52、18、53、66、31、39、56、54、59、45、51、68、69)，尤以HPV16、58、33、52、18型多见；14种低危型HPV型别(11、6、81、84、CP8304、1、7、8、46、63、64、70、75、76)。首次发现广东地区存在HPV46、52、81、84、CP8304型。HC-Ⅱ阴性并不能排除HPV感染，还须结合临床病理等去明确诊断。针对广东地区HPV感染的疫苗的研制和使用时，以及设计包括广东地区常见感染亚型的检测试剂盒时，须考虑广东地区的16种高危型HPV型别，尤其HPV16、58、33、52、18型别。2．广东地区宫颈癌及上皮内瘤患者人群中HPV感染特征及其主要型别研究采用PCR直接测序法，对宫颈癌等宫颈病变组织标本或宫颈脱落细胞标本、石蜡包埋宫颈癌组织标本进行了HPV基因测序分型，以调查广东地区致肿瘤性HPV的主要型别及其感染研究，为将来广东地区人群HPV疫苗的研制和应用提供流行病学依据。研究结果提示，广东地区宫颈病变患者HPV感染率为54.6％(239／438)；宫颈癌患者HPV16、33、18、58型分别占31.78％(34／107)、23.36％(25／107)、16.82％(18／107)和3.74％(8／107)。广东地区人群HPV33型感染较多，与国内其它学者结果有所不同，有明显的地区特点。本研究发现各类宫颈病变的HPV感染高峰年龄在21-40岁年龄段，其中宫颈癌患者高峰年龄在31-50岁年龄段。各年龄组宫颈癌高危型HPV感染率之间没有显著性差异，但是其中以31-40岁、41-50岁年龄组的高危型HPV感染率较高分别为85.2％(23／27)和82.5％(47／57)。不同年代宫颈癌发病年龄不同，1975-1984与1985-1994之间宫颈癌发病年龄没有差异(P=0.970)，而二者都与1995-2004有差异(P=0.05)，说明宫颈癌年龄提前10余年。本研究发现宫颈感染高危型HPV后约10年才能发展至宫颈癌，并且宫颈癌的发病年龄提前了近10年。疫苗接种年龄宜在21-40岁年龄段。3．广东地区宫颈病变组织HPV L1基因多态性分析HPV L1基因多态性分析在临床上有助于诊断分析和流行病学研究，在预防性疫苗的研究制备中具有重要意义。本研究对来自广东地区宫颈病变，尤宫颈癌组织中高危型HPV L1基因进行序列分析，以调查广东地区宫颈病变患者感染的HPV L1基因多态性，为适合广东地区人群HPV预防性疫苗的研制提供流行病学依据。研究结果提示，广东地区HPV33、52、58型L1的进化处于相对较低的进化地位，是其他HPV33、52、58型L1病毒株的祖先株。国内、外其他地区的HPV预防性疫苗不一定适用于广东地区；须研制适合广东地区人群宫颈病变的预防性疫苗；研制适合广东地区人群的宫颈病变预防性疫苗时，必须考虑HPV6 L1H315N、E431Q分离株；HPV16 L1优势病毒株(M368K／S375F／D412E)和HPV58 L1C350W、R364S、T366N分离株；以及兼顾HPV18、33、39、45、52、53、54、58型的基因多态性。4．广东地区宫颈病变组织部分高危型HPV(16、33、58)E6、E7基因多态性分析早期转录区的E6和E7主要与病毒细胞转化功能及致癌性有关，而且还具有对病毒基因和细胞基因转录的反式激活活性。本研究对来自广东地区宫颈病变，尤宫颈癌组织中高危型HPV E6、E7基因进行序列分析，以调查广东地区宫颈病变患者感染的常见高危型HPVE6、E7基因多态性，为适合广东地区妇女HPV治疗性疫苗的研制提供流行病学依据。研究结果提示，广东地区①HPV16 E6／E7变异株是：E6 D32E，E7 N29S；推测广东地区HPV16除了亚洲型(E7 N29S)和广东地区变异株(E6 D32E)以外，还有人口流动传入广东的变异株。②HPV33 E6／E7变异株是：E6 K35N、E6 K93N，与国内和日本报道一致；E7 A45E、A50P为本地变异株；广东地区HPV33 E6、E7基因处于标准株、广东地区分离株共存的状态。③HPV58 E6／E7变异株是：E6 K93N、E7 T20I／G63S，生物学功能也有相应改变。④在研制适合广东地区人群的HPV治疗性疫苗时，必须考虑HPV16、HPV33、HPV58E6／E7变异株。通过对广东地区宫颈病变患者感染的HPV型别分布和HPV L1、E6、E7基因多态性研究，为适合广东地区人群HPV预防性和治疗性疫苗的研制提供流行病学基础：①首次在广东地区人群HC-Ⅱ检测HPV DNA阳性的宫颈脱落细胞中发现有30种HPV亚型，HC-Ⅱ阴性并不能排除HPV感染。②首次发现广东地区人群宫颈存在HPV46、52、81、84、CP8304型感染；针对广东地区HPV感染的疫苗的研制和使用时，以及设计包括广东地区常见感染亚型的检测试剂盒时，须考虑广东地区的16种高危型HPV型别，尤其HPV16、58、33、52、18型别。③本研究发现各类宫颈病变的HPV感染高峰年龄在21-40岁年龄段，其中宫颈癌高峰年龄在31-50岁年龄段。宫颈合并高危型HPV感染后约10年才能发展至宫颈癌，而近年来宫颈癌的发病年龄提前了近10年。④疫苗接种年龄宜在21-40岁年龄段。⑤HPV16、33、18型是宫颈癌的主要致病型，有一定的人群或地域特点。⑥广东地区HPV33、52、58型L1的进化处于相对较低的进化地位，是其他HPV33、52、58型L1病毒株的祖先株；国内、外其他地区的HPV预防性疫苗不一定适用于广东地区；须研制适合广东地区人群的预防性疫苗，同时也须考虑HPV6 L1 H315N、E431Q分离株，HPV16 L1优势病毒株(M368K／S375F／D412E)和HPV58 L1 C350W、R364S、T366N分离株，以及HPV18、33、39、45、52、53、54、58型的基因多态性。⑦广东地区人群HPV16 E6／E7变异株是：E6 D32E，E7 N29S；HPV33 E6／E7变异株是：E6 K35N、E6 K93N；HPV58 E6／E7变异株是：E6 K93N、E7 T20I／G63S；国内、外其他地区的HPV治疗性疫苗不一定适用于广东地区，须研制适合广东地区人群的宫颈病变的治疗性疫苗，同时必须考虑HPV16、HPV33、HPV58 E6／E7变异株的影响。