论文部分内容阅读
目的:观察以TNBS/乙醇法诱导建立UC模型大鼠外周血来源的BMSCs向结肠黏膜组织的归巢及炎性损伤修复能力。比较参苓白术散与痛泻要方对该模型大鼠外周血BMSCs向结肠黏膜组织归巢及炎性损伤修复能力干预效应的差异,探测TNBS/乙醇法诱导建立UC大鼠模型的可能中医证候特征。方法:1药物制备依据参苓白术散和痛泻要方原方比例,采用传统中药煎煮方法分别浓缩至2.26g/ml、0.78g/ml,置于冰箱保存备用。2实验动物模型的建立与验证取SPF级健康雄性SD大鼠88只,体重在180-220g,分为空白组、模型组、参苓白术散组和痛泻要方组各22只,取72只进行造模,禁食不禁水12h后,注射TNBS/乙醇溶液至大鼠结肠,每周一次,连续5周。造模结束后随机选取2只空白组和2只模型组大鼠,迅速处死,剪取结肠组织,采用HE染色评价模型是否成功。3 BMSCs在大鼠体内的定植采用激光共聚焦显微镜观察DAPI标记BMSCs后经尾静脉注射在大鼠体内结肠黏膜组织的定植情况。采用HE染色观察各组大鼠结肠组织病理变化。4 Westernblotting检测各组大鼠结肠黏膜组织SDF-1/CXCR4蛋白的表达,RT-PCR法检测各组大鼠结肠黏膜组织SDF-1/CXCR4 m RNA的表达。结果:1经尾静脉注射BMSCs后,各组结肠黏膜修复情况肉眼观察结果如下:模型组与空白组比较,结肠黏膜严重糜烂、充血、水肿,肠壁增厚、僵硬,出现多个溃疡面,损伤评分升高,具有显著性差异且具有统计学意义(P<0.01);参苓白术散组与模型组比较,结肠黏膜充血程度、粘连程度稍有减轻,溃疡个数减少,损伤评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05);痛泻要方组与模型组和比较结肠黏膜糜烂、水肿、充血程度大幅减轻,损伤评分降低,差异具有统计学意义(P<0.01);痛泻要方组与参苓白术散组比较,结肠黏膜粘连程度降低,损伤评分的差异具有统计学意义(P<0.05)。镜下观察结果:空白组的结肠黏膜正常,肠腺细胞排列规则。模型组黏膜层肌层可见大量炎性细胞浸润,隐窝内散在中性粒细胞和嗜酸性粒细胞,腺体被破坏、多数不完整,部分细胞出现坏死,与空白组比较,损伤评分升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。参苓白术散组可见黏膜上皮细胞已修复,排列较规则,隐窝内可见少量中性粒细胞,黏膜下层散在中性粒细胞,与模型组比较,损伤评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。痛泻要方组黏膜上皮细胞排列规则,可见肉芽组织,肌层可见修复瘢痕,与模型组比较,损伤评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05),痛泻要方组与参苓白术散组比较,损伤评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2激光共聚焦显示结果:与空白组比较,模型组BMSCs含量增多,两组之间具有差异(P<0.05),参苓白术散组与痛泻要方组BMSCs含量均增多,具有差异性(P<0.01);与UC模型组比较,参苓白术散组和痛泻要方组BMSCs含量均增多,具有显著差异(P<0.01);与参苓白术散组比较,痛泻要方组BMSCs含量增多,具有显著性差异(P<0.01)。3 Westernblotting检测各组大鼠结肠黏膜组织SDF-1/CXCR4蛋白的结果显示,与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织SDF-1明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),CXCR4蛋白表达未见明显升高,差异无统计学意义(P>0.05)。参苓白术散组及痛泻要方干预后SDF-1与CXCR4蛋白表达水平明显升高差异有统计学意义(P<0.05),且痛泻要方优于参苓白术散组。4 RT-PCR法检测各组大鼠结肠黏膜组织SDF-1/CXCR4 m RNA的结果显示:与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织SDF-1及CXCR4 m RNA表达均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,参苓白术散组及痛泻要方组大鼠结肠黏膜组织SDF-1与CXCR4 m RNA表达水平明显上调,且痛泻要方明显优于参苓白术散组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:UC炎性损伤能够促进外周血BMSCs向结肠黏膜归巢,但并没参与UC结肠黏膜组织的损伤修复;参苓白术散和痛泻要方均能改善UC大鼠结肠黏膜组织的损伤,其作用机理可能与升高结肠黏膜组织SDF-1、CXCR4表达,促进外周血BMSCs向结肠黏膜的归巢有关。在以上干预效应中,痛泻要方组的作用明显优于参苓白术散组,根据中医“方证相应”理论,TNBS/乙醇法诱导建立的UC大鼠模型可能与肝郁脾虚证相关。