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戊型肝炎(Hepatitis E,HE)是世界范围内一种主要的急性病毒性肝炎,由戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)感染引发。戊型肝炎病毒基因组包含三个开放阅读框(ORF),其中ORF2编码的衣壳蛋白作为HEV病毒最外层的重要组成部分,在HEV的宿主识别、感染、发病以及诱导宿主产生免疫应答等方面都扮演着重要角色。有研究表明HEV衣壳蛋白的a.a.459-606区域(E2s domain)形成的同源二聚体是HEV中和活性的主要来源和免疫优势的最小单位。目前发现的HEV中和抗体的识别位点均位于该区域上。但进一步研究发现不同抗体在E2s domain上的识别区域相对独立,提示在E2s domain上可能存在着若干相对独立的表位区,但不同表位区在HEV免疫和中和等过程中行使的功能并不明确。本研究建立了一种以单抗盘为工具对HEV的抗原表位区进行分类的方法,并进一步对各表位区的功能进行研究。首先,通过筛选得到识别位点在病毒衣壳上暴露较为充分的抗体形成单抗盘,根据盘内单抗间的交叉阻断信息利用统计学的聚类分析对抗体进行分群,从而将单抗根据其识别表位的空间距离进行分类。其次,通过对衣壳表面氨基酸进行丙氨酸扫描,鉴定不同抗体群抗体在HEVE2s domain上的敏感氨基突变位点,并根据不同抗体群的关键识别位点对E2s domain上的表位区进行划分。最后基于分类结果,对各表位抗体进行中和活性及免疫优势性等功能分析,从而鉴定HEV衣壳蛋白E2s domain上的中和表位及优势表位的潜在区域。本研究发现HEV E2s domain上存在6个相对较为独立且功能不同的表位区:C1表位区覆盖位点由二聚体交界面的a.a.606向一侧延伸到靠近C6表位的a.a.530及靠近HEV P1结构域的a.a.525,该表位为非中和表位,且不具有免疫优势性;C2表位区关键识别位点为a.a.549和a.a.591,该表位区具有较强中和活性但无明显免疫优势性;C3表位区位于二聚体的顶部,以a.a.562和a.a.586为核心向二聚体交界面延伸至C1表位区a.a.532附近,识别该表位区抗体为3/4特异性抗体,具有弱中和活性,无明显免疫优势性;C4表位区覆盖位点包括a.a.488-490及a.a.532等,识别该表位的抗体也均为3/4特异性抗体,对HEV具有弱中和活性但无明显免疫优势性;C5表位区覆盖位点主要包括a.a.496,a.a.512,a.a.534,a.a.573-578等。该表位区的抗体以8C11为代表具有强中和活性,参与HEV免疫优势的形成;C6表位区在结构上和C5表位区有一定的重叠,但更偏向于二聚体的交界面及顶部,该表位区关键作用氨基酸为a.a.534和a.a.535,具有强中和活性且参与HEV免疫优势的形成。综上所述,本研究将统计学聚类分析和单抗性质分析相结合,发现HEVE2s domain上存在6个表位区;且抗HEV的中和抗体主要识别区域位于E2s domain同源二聚体的单体侧面,识别该区域顶端的抗体也具有一定的中和活性;而机体针对HEV的抗体免疫应答则很可能是多个不同表位区共同作用的结果。在本研究发现的6个表位区中,C2、C5和C6表位区是机体免疫的主要识别区域,也是HEV中和活性的主要靶点。该研究为HEV的免疫、中和过程及HEV疫苗的有效性提供了可能的分子机制,也为其他病毒衣壳蛋白上的功能区域研究提供了研究方法和潜在思路。