论文部分内容阅读
结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是全世界范围内最常见的肿瘤之一,在过去的几十年,由生活环境、饮食习惯等因素的改变,其发病率逐年上升且有年轻化趋势。尽管手术切除是治愈结直肠癌的主要手段,但是不良预后仍然是难以解决的问题,依然有超过40%的结直肠癌患者最终死于肿瘤转移。因此寻求一种改善不良预后的有效治疗方法显得尤为重要。CYP2S1是 CYP450家族的一种单加氧酶,位于19q13.1,共包含9个外显子。CYP2S1参与内源性或外源性致癌物的新陈代谢从而维持机体稳定。本实验利用shRNA特异性沉默人结直肠癌SW480细胞中CYP2S1基因,构建稳定沉默CYP2S1基因的细胞系。通过检测其增殖和迁移情况,探讨CYP2S1对细胞增殖及迁移的影响。使用不同浓度奥沙利铂诱导SW480细胞,检测奥沙利铂对CYP2S1表达量及细胞增殖的影响。本研究包括以下两个部分: 1.CYP2S1基因对结直肠癌SW480细胞增殖及迁移的影响 通过脂质体转染法获得稳定沉默CYP2S1基因的细胞系,采用Western blot和Q-PCR检测CYP2S1基因的沉默效率;台盼蓝计数法、CCK-8法和克隆形成实验检测CYP2S1基因对细胞增殖的影响;划痕实验和transwell实验检测CYP2S1基因对细胞迁移的影响。结果显示,与野生型细胞相比,转染组细胞增殖及迁移的速度加快,进一步研究发现,转染组细胞中β-catenin表达量有所上升。据此推测,CYP2S1的表达量的下调可能会导致Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin的积累,进而促进细胞增殖及迁移。 2.奥沙利铂对结直肠癌SW480细胞增殖的影响 通过CCK-8法检测不同浓度奥沙利铂对 SW480细胞增殖的抑制作用,使用Western blot检测奥沙利铂对CYP2S1基因表达量的影响。结果显示,随诱导时间的延长或药物浓度的增加,奥沙利铂对SW480细胞的抑制作用逐渐增强,呈时间-浓度依赖性。与野生型细胞相比,奥沙利铂诱导后细胞CYP2S1基因的表达量显著增加。推测,奥沙利铂可能通过上调CYP2S1的表达量从而发挥抑制细胞增殖的作用。