Nucleostemin在肝癌组织及离体细胞中的表达特性研究

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Nucleostemin(核干细胞因子,NS)是一新近发现的细胞因子,由McKay and Tsai于2002年,在大鼠胚胎脑皮层干细胞和原始骨髓细胞中发现并克隆。NS蛋白是一种p53结合蛋白,存在于干细胞核仁中。研究表明在胃癌、胰腺癌、膀胱癌、成骨肉瘤等癌组织,一些良性肿瘤和良性增生组织中NS基因也普遍高表达。NS在两类细胞中的发现,暗示该基因在两类细胞共同特征中可能起着相似的作用。 肝癌是国际上死亡率位于第五的恶性肿瘤,并且国际上有关于NS基因在肝癌中表达情况如何还鲜有报道,因此肝癌这一典型的癌症组织为NS的研究提供了很好的载体。本文研究NS基因在肝癌组织和细胞中的表达特性,探讨NS基因在肝癌发生中的生理意义。 本研究先从肝癌组织cDNA库中克隆出NS片段和全长;通过半定量-PCR的方法测定7种人胚胎组织中NS基因在转录水平上的表达情况;再以同样方法在40对肝癌和癌旁组织及三种离体肝癌组织细胞株HepG2(人低转移肝癌细胞系)、SMMC-7721(人肝癌细胞系,转移能力较HepG2高)、MHCC(人高转移肝癌细胞系)中测定NS基因转录水平的表达。证实在转录水平,NS基因的表达随肝癌细胞增值能力及迁移能力的增强而升高。在翻译水平上,先从上述三种离体细胞株中提取细胞蛋白,用Western-Blot的方法证实在翻译水平,细胞核中的NS蛋白随细胞迁移能力的增强而增高。综合以上各个结果,可以看出,NS基因确实在肝癌细胞增殖过程中发挥作用。 另外,本文还将NS的全长编码序列连接入pAD-pATC-CMV腺病毒载体系统中,构建成功pAD-pATC-CMV-NS载体,通过Pac-Ⅰ酶切得到重组腺病毒基因组,经过转染293a细胞,得到了包装好的重组腺病毒,为进一步地研究该基因的功能打下了基础。
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