实验目的：　　 病理性瘢痕主要包括瘢痕疙瘩(Keliod，K)和增生性瘢痕(Hypertrophic scar，H)，是真皮及真皮下创伤不正常愈合所引起的，以胶原过度沉积为组织病理学特征的皮肤外观形态改变的统称。它们的共同特征是过度的瘢痕形成，造成局部外形和功能受损。它们不仅破坏了体表美，同时可伴有疼痛和瘙痒等症状，还可能影响相关组织或器官的生理功能，导致畸形，甚至可以发生癌变，严重影响患者的生活质量。皮肤创伤后病理性瘢痕的形成是整形外科面临的难题之一，所以，对病理性瘢痕的研究具有重要的临床意义。病理性瘢痕的治疗很大程度上依赖于对其发病机制的明了，但其发病机制十分复杂，国内外许多学者已从皮肤张力、部位、年龄、皮肤色素、感染、异物和遗传机制等方面对病理性瘢痕的发病机制进行了一系列的研究，但仍不能用任何单一因素来完整解释，多种因素的共同作用是学者们目前普遍接受的观点。我们通过研究β-环连蛋白(β-catenin)在病理性瘢痕中的表达情况，探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在病理性瘢痕发病机制中的作用，为临床预防和治疗瘢痕提供一定的实验和理论依据。　　 实验方法：　　 随机选取瘢痕疙瘩患者30例为K组，增生性瘢痕患者30例为H组，同时随机选取其他整形美容手术患者切除的正常皮肤组织30例作为对照N组。取组织剪成5*5*5mm大小放入EP管中加匀浆缓冲液、组织蛋白裂解液。剪碎、超声粉碎后离心，取上清液作为样品。以牛清蛋白(BSA)为标准品，用考马斯亮蓝测定法定量蛋白，绘制蛋白定量标准曲线，于分光光度计下测定在595nm处的吸收度，计算所提取的蛋白的浓度。每例标本取总蛋白100μg，用5％浓缩胶，10％分离胶的SDS-PAGE电泳，电压为80V半小时，120V半小时，用转膜缓冲液平衡3次。滤纸和硝酸纤维膜在转膜缓冲液中平衡，电压90V转印2小时，结束后TTBS洗膜3次。5％(W/V)去脂奶粉室温摇床封闭2小时。封闭后TTBS洗2次，孵育小鼠的单克隆抗体β-catenin(1：400)，β-actin(1:500)，4℃过夜。TTBS洗三次，每次10分钟，孵兔抗鼠IgG(1:5000)的二抗，室温孵育2小时。TTBS洗3次，每次10分钟。加ECL发光剂，在1～20分钟内显影、定影，胶片洗涤干燥后洗像。用Quantity_One软件测定目的条带的光密度值(OD值)和面积(S)及β-actin光密度值(od)和面积(s)，以(OD×S)/(od×s)代表β-catenin蛋白的相对表达情况。计算每例标本中β-catenin蛋白表达量与β-actin蛋白表达量的比值，采用SPSS13.0统计软件进行分析，实验数据用x±s表示，β-catenin蛋白在不同组间的比较采用两样本均数的t检验和方差分析，以P＜0.05具有统计学意义。　　 实验结果：　　 β-catenin在病理性瘢痕中的表达水平明显高于正常皮肤，增生性瘢痕组中β-catenin表达水平较正常皮肤组升高约1.830倍，瘢痕疙瘩组中β-catenin的表达水平较正常皮肤组升高约2.243倍。增生性瘢痕、瘢痕疙瘩组与正常皮肤组比较其差异有统计学意义(P＜0.01)，增生性瘢痕组与瘢痕疙瘩组比较有差异但其差异无统计学意义(P＞0.05)。　　 实验结论：　　 1、β-catenin的过度表达是病理性瘢痕形成的机制之一。　　 2、Wnt/β-catenin信号转导通路的激活在病理性瘢痕的形成中起到重要作用。