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目的:观察益气清湿化瘀法治疗盆腔炎性疾病(pelvic inflammatory disease,PID)反复发作(气虚血瘀夹湿型)的临床疗效,并从生长停滞特异蛋白6(growth arrest specific gene6,Gas6)与Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR2)和Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)的相关性探讨益气清湿化瘀法PID反复发作(气虚血瘀夹湿型)的机制。 方法:选择2016年2月-2016年12月在成都中医药大学附属医院妇科门诊就诊的PID反复发作患者50例设为试验组,选择健康人25例设为对照组,试验组采用益气清湿化瘀综合方案(中药盆炎康复汤内服、妇科灌肠液灌肠及艾灸中脘、神阙、关元、足三里)治疗3个月,健康对照组不予处理。试验组每2周进行证候评分,每4周进行体征评分,治疗12周后观察治疗前后中医证候评分及临床疗效,停药12周后评估其复发情况。分别采集健康对照组入组时及试验组治疗前后的血液进行以下检测:(1)采用流式细胞术检测外周血白细胞中TLR2、TLR4蛋白的表达率;(2)采用逆转录-聚合酶链反应(Real-time Polym erase Chain Reaction,real-time PCR)检测外周血单核细胞中TLR2、TLR4 mRNA的表达水平;(3)采用酶联免疫吸附法( enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清Gas6水平。试验组随机选择15例行安全性评价。 结果: 1.临床观察结果: (1)单项症状疗效:下腹疼痛或坠痛、或腰骶疼痛、经行或劳累后加重、带下量多、色白或黄、体倦乏力、经期延长或月经量多、经血淡暗或有块、脘闷纳呆、口腻等单项症状疗效治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。 (2)单项体征疗效:子宫活动受限及压痛、左附件压痛、右附件压痛、左附件增厚及包块、右附件增厚及包块、宫骶韧带增粗及触痛等单项体征疗效治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。 (3)止痛疗效:治疗后,试验组痊愈率24.00%,显效率36.00%,有效率34.00%,总有效率94.00%,治疗前试验组盆腔疼痛评分4.80±1.40,治疗后为1.68±1.10,较治疗前下降3.12±1.62,自身前后对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。 (4)体征疗效:治疗后,试验组痊愈率2.00%,显效率56.00%,有效率38.00%,总有效率96.00%,治疗前试验组体征疗效评分9.02±1.99,治疗后,试验组体征疗效评分为3.60±1.83,较治疗前下降5.42±2.52,自身前后对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。 (5)中医证候疗效:治疗后,试验组痊愈率0.00%,显效率74.00%,有效率22.00%,总有效率96.00%,试验组治疗前中医证候疗效评分9.96±3.74,治疗后为4.52±2.21,较治疗前下降5.44±1.53,自身前后对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。 (6)试验组安全性评价:试验过程中发生不良事件3例,其中与研究有关的轻度不良反应2例,实验室检查均无明显异常,未发生严重不良事件。 (7)复发率:45例PID反复发作患者中,盆腔疼痛痊愈和显效的30例患者经治疗停药3月后进行病情评估,其中复发2例,未复发28例,复发率为6.67%。 2.检测结果分析: (1)蛋白表达指标:观察前外周血单核细胞中TLR2、TLR4蛋白阳性表达率试验组分别为59.80±21.39、32.17±21.16,对照组分别为45.99±18.91、23.70±16.76,均明显高于淋巴细胞中及粒细胞中的表达率,且试验组均高于对照组,TLR2蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05),TLR4蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后自身对照比较,外周血白细胞中TLR2、TLR4蛋白表达率治疗后均低于治疗前,三类白细胞中TLR2蛋白表达率差异均有统计学意义(P<0.05),单核细胞中TLR4蛋白表达率差异有统计学意义(P<0.05),而淋巴细胞及粒细胞中TLR4蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。 (2)基因表达指标:观察前两组外周血单核细胞TLR2、TLR4 mRNA的表达进行组间比较,TLR2、TLR4mRNA表达水平试验组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前后试验组自身对照比较,TLR2、TLR4 mRNA表达水平治疗后低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。 (3)细胞因子指标:观察前两组外周血Gas6的表达水平进行组间比较,试验组高于对照组,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗前后自身对照比较,Gas6表达水平治疗后低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。 相关性分析:试验组TLR2与TLR4蛋白的表达及TLR2与TLR4mRNA的表达均呈正相关,相关系数分别=0.348、0.622,后者相关性较前者显著;对照组TLR2与TLR4蛋白的表达及TLR2与TLR4mRNA的表达均呈正相关,相关系数分别=0.483、0.599,后者相关性较前者显著;试验组Gas6与TLR4蛋白、TLR2与TLR4mRNA的表达均呈负相关,相关系数分别=-0.175、-0.327、-0.052,其中,Gas6与TLR2mRNA的相关性较其余二者显著;对照组Gas6与TLR2蛋白、TLR2与TLR4mRNA的表达均呈负相关,相关系数分别=-0.016、-0.091、-0.19,相关性均不显著。 结论: 1.益气清湿化瘀综合方案治疗PID反复发作在改善盆腔疼痛症状、体征及中医证候方面疗效确切,停药3月后复发率低,无明显不良反应。 2.TLR2、TLR4、Gas6可能参与了PID反复发作的发病过程。 3.益气清湿化瘀综合方案治疗PID反复发作的疗效机制可能与其下调外周血单核细胞中TLR2、TLR4及外周血Gas6的表达有关。 4.TLR2与TLR4在PID反复发作的免疫反应中可能呈正相关,发挥着相互协调的作用;Gas6与TLR2 mRNA在PID反复发作的免疫反应中可能呈负相关,发挥着相互抑制的作用;而Gas6与TLR4 mRNA、TLR2、TLR4蛋白在PID反复发作的免疫反应中可能无明显的相关性。