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目的:本次实验探讨S100P过表达与肝细胞癌合并门静脉癌栓的相关性研究。方法:1、组织标本来源:广西医科大学附属肿瘤医院肝胆胰脾外科;HCC患者手术时间:2015、1至2016、12阶段。采用反转录定量PCR(RT-QPCR)技术检测肝细胞癌(HCC)患者癌组织与相对应的癌旁组织中S100PmRNA的表达差异,以及S100PmRNA在癌栓组织中的表达情况;Western免疫印迹方法(WB)检验S100P蛋白在HCC患者癌组织与相对应的癌旁组织以及癌栓组织中蛋白层面的表达差异;并采用Kaplan-Meier法估算S100P相对过表达和相对低表达组的RFS(无瘤生存时间),使用对数秩检验(Log-rank test)初步计算两组RFS的差异性;采用免疫组化显示S100P在HCC组织中的分布范围。2、选取SMMC-7721与LM3肝癌细胞株为研究对象,应用慢病毒介导的基因沉默技术分别构建四组S100P基因沉默细胞株SMMC-7721-Sh1组、SMMC-7721-Sh2组与LM3-S100P-sh1组、LM3-S100P-sh2组。采用一系列细胞功能学实验比较S100P基因沉默前后,细胞生物学功能的变化。包括CCK8法检测肝癌细胞体外增殖能力、细胞划痕实验检测细胞迁移能力、Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力、流式凋亡技术检测细胞凋亡情况的变化。3、WB技术检测沉默S100P基因前后,上皮-间质转化(EMT)通路中E-cadherin、EPCAM、N-cadherin、Twist1、Vimentin等相关蛋白标志物的表达变化。结果:1.此次共选取173例肝癌患者的组织,根据影像学诊断与组织病理学诊断标准将173例患者进行如下分组:癌旁组(N=173例);门静脉癌栓(PVTT)组(N=34例),HCC合并PVTT患者组(N=34例);HCC合并微血管侵犯(MVI)(M1)患者组(N=46例);HCC合并MVI(M2)患者组(N=44例);HCC既无MVI又无PVTT患(M0)者组(N=29例)。RT-QPCR与WB检测发现S100P(mRNA/蛋白)在癌组织中的表达程度明显高于其在癌旁中的表达程度(P<0.05);S100P(mRNA/蛋白)在PVTT组与HCC合并PVTT组的相对表达量分别大于其在HCC合并MVI组(II级)中的相对表达量(P<0.05);S100P(mRNA/蛋白)在HCC合并MVI(II级)中的相对表达量大于其在HCC合并MVI(I级)中的相对表达量(P<0.05);S100P(mRNA/蛋白)在HCC合并MVI(I级)中的相对表达量大于其在HCC合并MVI(I0级)中的相对表达量(P<0.05)。S100P(mRNA/蛋白)相对高表达的HCC患者组的RFS低于S100P(mRNA/蛋白)相对低表达HCC患者组。免疫组化结果显示:细胞核与细胞浆中均发现有S100P的分布,癌栓中也发现了S100P的存在。2.CCK8法检测细胞增殖实验结果表明:转染第四天,与未处理细胞株组相比较,S100P基因沉默组OD值明显减小,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.细胞划痕实验观察发现:与未处理细胞株组相比较,S100Psh组在48h、72h的细胞迁移率均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.Transwell侵袭实验:与未处理细胞株组相比,S100Psh组细胞穿膜数显著性降低,差异具有统计学意义。(P<0.05)。5.流式细胞技术检测细胞凋亡显示:S100P沉默后,S100Psh组细胞凋亡率明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。6.S100P基因沉默后,ETM通路中显著标志物E-cadherin、N-cadherin、EPCAM蛋白表达量均明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:S100P与HCC门静脉侵袭与转移之间具有密切联系,在HCC门静脉侵袭与转移过程中可能发挥重要作用。在HCC的发生发展过程中,S100P可能通过介导EMT通路的改变促进HCC的发生发展。