五肽胃泌素及丙谷胺对人胃癌SGC7901细胞增殖及RegⅣ表达的影响

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【目的】1.研究不同浓度的五肽胃泌素对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响及其受体拮抗剂丙谷胺能否阻滞自分泌胃泌素和外源性胃泌素的促生长作用。2.观察并探讨不同浓度的五肽胃泌素、丙谷胺及联合用药对人胃癌SGC-7901细胞形态的变化及RegⅣ表达的影响。3.分析不同浓度的丙谷胺对人胃癌SGC-7901细胞细胞周期及凋亡率的影响。【方法】取体外培养并处于对数生长期的人胃癌SCG-7901细胞进行实验。1.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测不同浓度五肽胃泌素(10-5、10-6、10-7、10-8mol/L)、丙谷胺(10-2、10-3、10-4、10-5mol/L)及两者联合对人胃癌SGC-7901细胞的生长增殖率、抑制率。用倒置光学相差显微镜观察不同分组药物对细胞形态特征的影响;2.碘化丙啶(PI)染色,通过流式细胞仪(FCM)分析细胞周期阻滞情况;使用AnnevinV/FITC-PI分析细胞凋亡率;3.采用免疫细胞化学法(ICC)检测五肽胃泌素(10-7mol/L)、丙谷胺(10-2mol/L)及两者联合对人胃癌SGC-7901细胞中RegⅣ表达的影响。【结果】1.浓度为10-5、10-6、10-7mol/L的五肽胃泌素均具有促进细胞增殖作用,与对照组相比差异显著(P<0.01),10-7mol/L时最显著(P<0.001),10-8mol/L时促增殖作用与对照组相比有差异;10-2、10-3、10-4mol/L的丙谷胺均能抑制细胞的增殖,与对照组相比差异显著(P<0.01),10-5mol/L时抑制作用无差异(P>0.05);10-7mol/L的五肽胃泌素与10-2、10-3mol/L的丙谷胺联合时,均能抑制细胞的生长,与浓度为10-4、10-5mol/L的丙谷胺联合均具有促增殖作用,与对照组相比均有差异(P<0.05),丙谷胺及两药联合时均表现为随着药物浓度的增加,作用逐渐增强,即具有剂量依赖性。2.五肽胃泌素作用于人胃癌SGC-7901细胞后,细胞增殖速度加快、数量增加、核变大变圆。较小浓度的丙谷胺作用于SGC-7901细胞时主要表现为凋亡的形态学变化,细胞缩小变圆、附壁能力降低;较大浓度时主要呈坏死的表现,脱落细胞增多,并可见细胞内空泡和坏死的细胞碎片。荧光显微镜下可见细胞内有凋亡小体。3.分别消化收集用不同浓度的丙谷胺处理48h的SGC7901细胞。与阴性对照组相比,10-4、10-3、10-2mol/L的丙谷胺均表现为S期阻滞,抑制细胞增殖,与阴性对照组比较差异显著(P<0.05)。10-4、10-3、10-2mol/L的丙谷胺在早期及晚期凋亡作用,与阴性对照组比较有差异(P<0.05)。4.10-7mol/L的五肽胃泌素作用于SGC7901细胞,能使RegⅣ的表达增强,10-2mol/L的丙谷胺及两药联合作用均使RegⅣ的表达下降,与阴性对照组比较差异显著(P<0.0083);丙谷胺组与联合组比较无差异(P>0.0083)外,其它组两两比较均有差异(P<0.0083)。【结论】五肽胃泌素能促进人胃癌细胞SGC7901的增殖,并且使细胞中RegⅣ表达增加,在一定范围内,具有剂量依赖效应;其受体拮抗剂丙谷胺能阻断自分泌胃泌素及外源性胃泌素对胃癌细胞的促增殖作用,并使RegⅣ基因表达下降,丙谷胺的这种抑制作用或许与阻滞细胞周期于S期有关;胃泌素可能通过胃癌细胞中RegⅣ表达而间接发挥促细胞增殖作用,提示RegⅣ是胃癌发生发展过程中一个关键的下游基因。
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