论文部分内容阅读
目的:观察治疗性浅低温(34℃)对肥厚心肌的缺血再灌注损伤的影响,探讨PI3K和NO途径在肥厚心肌的缺血再灌注损伤的作用,观察MMP-9、MMP-2及IL-1β在肥厚心肌缺血再灌注损伤中和PI3K、NO途径之间可能的联系。方法:成年健康雄性SD大鼠72只(由南昌大学动物研究中心提供),将其随机分为6组:正常心肌对照组(Sham组,12只)、肥厚心肌对照组(Control组,12只)、心肌缺血再灌注组(I/R组,12只)、34℃浅低温心肌缺血再灌注组(34H+I/R组,12只)、34℃浅低温心肌缺血再灌注+NOS抑制剂L-NAME组(34H+I/R+L-NAME组,12只)、34℃浅低温心肌缺血再灌注+PI3K抑制剂wortmannin组(34H+I/R+WORT组,12只)。Sham组:正常心肌大鼠组,不做任何处理;Control组、I/R组、34H+I/R组、34H+I/R+L-NAME组、34H+I/R+WORT组行腹主动脉缩窄术后饲养两月,建立经典压力负荷性心肌肥厚模型。Control组:不做I/R处理;I/R组:用37℃灌注液持续灌流大鼠心脏至平衡(30min)后,进行缺血30min,然后37℃灌注液进行再灌注120min;34H+I/R组:再灌注期,34℃灌注液进行再灌注120min;34H+I/R+L-NAME组:再灌注期,34℃灌注液(含NOS抑制剂L-NAME)进行再灌注120min;34H+I/R+WORT组:再灌注期,34℃灌注液(含PI3K抑制剂wortmannin)进行再灌注120min。记录平衡缺血前(T0),再灌注15 min(T1),30min(T2),60min(T3),120min(T4)各时间点的心率(HR)、左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压升高的最大速率(dp/dtmax)与左心室内压升高的最小速率(dp/dtmin)。测定心脏缺血前和再灌注期第15min、30min、60min以及120min流出的灌注液中心肌酶(LDH、CK)的释放量和NO值;在再灌注120min末,测定心脏肥厚指数;各组随机取6只大鼠离体心脏用western blot测定PI3K、IL-1β、MMP-2及MMP-9蛋白含量,并各组随机取6只大鼠离体心脏测定TTC染色后的心肌梗死面积。结果:1、心脏肥厚指数的变化Control组、I/R组、34H+I/R组、34H+I/R+L-NAME组及34H+I/R+WORT组的心脏肥厚指数明显高于Sham组(P<0.0l),Control组、I/R组、34H+I/R组、34H+I/R+L-NAME组及34H+I/R+WORT组间无明显差异。2、血流动力学参数的变化各组平衡期血流动力学参数差异无统计学意义(P>0.05);与I/R组相比,34H+I/R组在各时间点心率均明显减少(P<0.01);I/R组、34H+I/R+L-NAME组、34H+I/R+WORT组之间,各组相同时间点心率差异没有显著性意义(P>0.05)3、灌注液中心肌酶(LDH、CK)释放量的比较与I/R组比较,34H+I/R组的心肌酶释放量显著降低(p<0.05);与34H+I/R组相比,34H+I/R+WORT组与34H+I/R+L-NAME组的心肌酶释放量显著性升高(p<0.05)4、肥厚心肌缺血再灌注损伤后PI3K蛋白表达和NO生成水平的变化34H+I/R组与I/R组相比,PI3K蛋白表达水平显著升高(p<0.05),NO含量明显增多;在34H+I/R+L-NAME组和34H+I/R+WORT组中,治疗性浅低温所造成的PI3K蛋白的高表达被逆转(p<0.05),肥厚心肌NO生成明显减少(p<0.05)。5、心肌梗死面积的变化与I/R组相比,34H+I/R组治疗性浅低温明显缩小肥厚心肌大鼠心脏缺血再灌注损伤产生的心肌梗死面积(p<0.05)。与34H+I/R组相比,在34H+I/R+L-NAME组和34H+I/R+WORT组心肌梗死面积在I/R损伤后显著扩大(p<0.05)。6、肥厚心肌缺血再灌注损伤后MMP-2、MMP-9及IL-1β蛋白的表达与Control对照组相比,I/R组肥厚心肌中MMP-2、MMP-9和IL-1β蛋白的表达显著升高(p<0.01)。MMP-2和MMP-9蛋白在34H+I/R组中的表达与I/R组无显著性差异,而与I/R组相比,34H+I/R组中IL-1β表达明显减少(p<0.05);34H+I/R+L-NAME组和34H+I/R+WORT组,与34H+I/R组相比,MMP-2和MMP-9蛋白表达水平无显著性改变(p>0.05),而IL-1β的表达量有显著性升高(p<0.05)。结论:1、治疗性浅低体温可通过减少肥厚心肌组织LDH和CK的释放量,减少心肌梗死面积,从而对离体肥厚心肌缺血再灌注损伤产生保护作用;2、NOS抑制剂L-NAME和PI3K抑制剂wortmannin能逆转治疗性浅低温对肥厚心肌大鼠离体缺血再灌注损伤的保护作用;3、NOS抑制剂L-NAME和PI3K抑制剂Wortmannin不能影响MMPs的表达;4、NO可能介导了治疗性浅低体温(34℃)改善炎症反应的肥厚心肌保护作用。