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穗花杉双黄酮是卷柏中的一种有效成分。它具有细胞毒和抗肿瘤、抗病毒、抑菌抗炎、抗氧化和舒张血管等多种药理活性,在化妆品、保健品和医药领域有着广阔的前景。本文确定了卷柏中穗花杉双黄酮的最佳提取条件;建立了初步纯化提取物的两步沉淀工艺;采用了制备型高效液相色谱、硅胶柱层析和低压柱层析对粗品进行了分离纯化。1、研究了穗花杉双黄酮的高效液相色谱分析方法,该分析方法分离效果好、简便快捷、节省溶剂,是一种快速准确检测穗花杉双黄酮的方法。确定反相高效液相色谱条件为:色谱柱为反相C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm, DiamodsilTM),检测波长为337 nm,流动相甲醇:0.1%TFA,采用梯度洗脱模式,柱温30℃,流速1.0 mL/min,进样量10μL。样品回收率为98.4%,精密度RSD=0.94%。2、确立了卷柏中穗花杉双黄酮的最佳提取条件,其工艺参数为:提取溶剂为80%乙醇,回流提取,料液比1:12(g/mL),提取两次,提取温度75℃,提取时间0.5h。所得穗花杉双黄酮粗品的纯度为5.92%,提取率为93.24%。3、建立了卷柏提取物的两步沉淀工艺,初步纯化粗提物。卷柏粗提物的纯度为5.92%,经两步沉淀工艺初步纯化后,其纯度可达58.19%,回收率为88.66%。与传统工艺相比,该方法简便、成本低廉且未使用额外的有机溶剂。4、采用制备型高效液相色谱分离纯化穗花杉双黄酮粗品,其色谱条件为:流动相甲醇:0.1%TFA (65:35, v/v),流速10mL/min,检测波长为337nm,柱温为常温。经制备型高效液相色谱分离精制后产品纯度可达99.2%,回收率可达94.7%。5、研究了硅胶柱层析分离纯化穗花杉双黄酮粗品条件。以CHCl3:MeOH体系洗脱,所得产品纯度可达97.16%,回收率可达50.74%。6、建立了以Hexane:EtOH洗脱体系低压柱层析纯化穗花杉双黄酮粗品的方法。比较了等度洗脱和梯度洗脱方式。梯度洗脱模式下,当上样量为100 mg时,所得产品纯度为98.7%,回收率可达87.8%,且目标产物的收集时间仅为11 min,溶剂耗费也显著降低。7、采用高效液相色谱、质谱和核磁共振对穗花杉双黄酮产品进行了结构鉴定,验证了实验结果。