论文部分内容阅读
粘孢子虫（Myxosporean）是一类形态微小,结构组织高度退化的后生动物,隶属刺胞动物门,放射孢子虫是粘孢子虫生活史中在海淡水环节动物宿主中的有性生殖发育阶段。粘孢子虫营寄生生活,主要感染海淡水鱼类。少数粘孢子虫种类的寄生可造成养殖鱼类大量死亡,给水产养殖业带来巨大损失。本研究在对江苏地区鱼类寄生粘孢子虫调查过程中,从太湖野生鲢不同组织器官和鲫鱼养殖池塘苏氏尾鳃蚓中分别发现多种碘泡虫和放射孢子虫,通过形态学,组织病理学和分子学的方法对发现的粘孢子虫进行形态描述和种类鉴定;此外,通过Percoll密度梯度离心分离纯化鲫鱼寄生洪湖碘泡虫,探索建立了用SYTOX green nucleic acid stain荧光染色鉴定洪湖孢子虫死活和体外药物筛选方法。本研究实验结果如下:（1）2018-2019年对异育银鲫的养殖池塘调查中,从底栖寡毛类苏氏尾鳃蚓中共发现了 10种放射孢子虫。基于形态特征鉴定,10种放射孢子虫分别属于6个集合类群,其中雷氏放射孢子虫1种、桔瓣放射孢子虫2种、新放射孢子虫2种、三突放射孢子虫2种、棘放射孢子虫2种和匈牙利放射孢子虫1种。这些放射孢子虫中有4种与作者实验室前期描述种类一致,5种为新发现物种,一种补充描述物种。本文描述了其形态特征并通过SSU rDNA序列Blastn 比对分析对应的粘孢子虫种类,结果表明新发现的 Triactinomyxon HZ 和 DF 与文献中同类群的 Triactinomyxon CZ（Genbank JX477771）序列相似性最高（93.39%和 94.48%）;Echinactinomyxon type LY1 与金鱼肌肉寄生Myxobolus lentisuturalis（Genbank AY119688）相似性最高（96.88%）;Echinactinomyxon type LY2 与 Hungactinomyxon（Genbank AY779062）相似性最高（97.86%）;Neoactinomyxum type LY 与文献报道的 Thelohanellussp.（Genbank 登录号MK412938）相似性最高（92.48%）;本文报道的Hungactinomyxon DF与匈牙利发现的 Hungactinomyxon（AY779062）序列相似度达 99.41%-99.64%,为同一物种。系统发育分析显示TriactinomyxonHZ和DF与鱼体寄生的四极虫亲缘关系较近;Hungactinomyxon DF 和 Echinactinomyxon LY1 及 LY2 与碘泡虫亲缘关系较近;Neoactinomyxum LY与单极虫聚为一支。本研究新报道的放射孢子虫DNA序列为粘孢子虫生活史提供重要基础数据。（2）药物筛选结果发现桉树油、青蒿素、敌百虫,在浓度0～512 μg/mL条件下对洪湖碘泡虫存活率没有影响,盐酸氯苯胍在512μg/mL浓度下,对洪湖碘泡虫有一定的杀灭作用;药用植物提取物牛至油随浓度从0.06～1 μL/mL递增,杀灭孢子虫效果逐渐上升。牛至油主要有效成分为香芹酚和百里香酚。进一步分析发现香芹酚浓度0.5μL/mL时,孢子存活率仅为2.76%,百里香酚浓度512μg/mL时,孢子存活率为19.18%,香芹酚杀灭洪湖碘泡虫效果更好。香芹酚对CIK细胞的半数致死浓度为为118μL/mL（24h）和0.086μL/mL（48h）;鱼体急性毒性实验表明香芹酚对异育银鲫的半数致死浓度为1148.32 mg/kg。（3）江苏地区鱼类寄生粘孢子虫调查过程中,发现三种碘泡虫。其中感染鲢鱼肾脏2种碘泡虫,通过形态学特征、宿主、感染位点等确定分别为Myxoboluslieni（Nie et Li,1973）和Myxobolus varius（Achmerov,1960）;组织病理学分析,M.lieni感染鲢鱼肾小管上皮组织细胞,M varius分布在肾间质,并被大量的铁血黄素包围;一种鲢咽上壁寄生碘泡虫,未定种。通过Blastn比对发现,没有与三种碘泡虫序列一致的物种;通过系统发育分析表明,三种鲢寄生碘泡虫聚在一枝,位于淡水鲤科鱼类,且咽部寄生碘泡虫（未定种）和M.lieni形成姊妹枝,亲缘关系较近。