微波逆转膀胱肿瘤T24/ADM细胞的实验研究

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膀胱肿瘤是泌尿生殖系最常见的恶性肿瘤。目前膀胱肿瘤的治疗手段仍以手术、化疗、放疗及免疫辅助治疗为主。术后用药物进行膀胱内灌注是治疗膀胱肿瘤的重要手段,然而化疗后,仍有40%~80%的复发率,肿瘤细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致肿瘤化疗失败的主要原因,有资料表明,90%以上肿瘤患者的死因与MDR有关,因此如何逆转MDR是一个亟待解决的问题。微波是一种高频电磁波。因其频率高、波长短而具有如下特点:(1)加热深度大、方向性好,也可以聚焦,得到很窄的微波束。(2)人体组织局部吸收微波电磁能后所产生的热量不易散发到外部。(3)在临床治疗时不需要任何的耦合剂。(4)微波热疗安全可靠,定位准确,便于操作。(5)设备价格低廉,因而是逆转膀胱肿瘤细胞MDR的理想手段。为此,我们系统地研究了微波逆转效应,从中筛选出最佳参数组合,并将这种最佳组合用于逆转MDR,同时初步探讨其作用机制。第一部分膀胱肿瘤T24细胞多药耐药模型的建立及耐药特性鉴定目的:建立膀胱肿瘤T24细胞多药耐药模型并鉴定其耐药特性。方法:以膀胱肿瘤T24细胞为亲本细胞,采用阿霉素(adriamycin,ADM)浓度梯度递增法诱导细胞耐药。光镜观察新建细胞系的形态学特点,MTT法检测细胞对药物的敏感性,RT-PCR检测MDR1的mRNA。结果:6个月后建立了耐药细胞系,T24/ADM耐药细胞系在形态学上与亲木细胞无明显差别,但对ADM的耐药性增高。T24/ADM对ADM的耐药指数为15.79,RT-PCR检测MDR1水平增高。P<0.01各组间存在显著性差异。结论:新建细胞系T24/ADM具有多药耐药特性,其耐药机制主要与MDR1基因产物P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的过度表达有关,达到下一步研究耐药逆转实验的要求。第二部分微波对膀胱肿瘤T24/ADM细胞的逆转效应目的:观察微波对膀胱肿瘤T24/ADM细胞的逆转效应。方法:用频率2450MHz,波长12.24cm的微波照射膀胱肿瘤T24/ADM细胞,采用MTT法检测T24/ADM经微波逆转后对ADM抗癌药的敏感性及逆转倍数。结果:微波逆转T24/ADM耐药细胞后,T24/ADM细胞对阿霉素的IC50由逆转前的0.992ug/ml降至0.382 ug/ml,逆转指数为2.60倍。部分恢复了对化疗药物的敏感性。P<0.01各组间存在显著性差异。结论:微波能部分逆转膀胱肿瘤T24细胞多药耐药,其逆转耐药的机制有:(1)提高细胞对药物的敏感性;(2)促进细胞对药物的摄取,提高细胞内药物浓度。
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