反复自然流产(recurrentspontaneousabortion，RSA)仍然是当前妇产科医生及患者面临的一个相当棘手的问题。RSA定义为连续二次及二次以上的自然流产，发生率约占总妊娠数的5％，占自然流产数的15％。RSA的发病原因复杂，涉及因素广，主要将其发病机制归纳为：遗传因素、生殖道异常、内分泌紊乱、感染因素和不明原因。其中不明原因的反复自然流产(unexplainedrecurrentspontaneousabortion，URSA)约占15％-50％。随着生殖免疫的发展及免疫检测技术的提高，已发现80％的URSA为免疫因素所致。RSA的免疫学机制及免疫治疗已经成为国内外学者的研究热点。 生殖免疫观点认为，胚胎作为一种同种异体“移植物”种植于子宫腔内，能被母体所接纳，不引起母体免疫系统的攻击，是极其复杂而且受到精细调控的免疫学现象。这一现象取决于胚胎与母体间的相互作用，一方面胚胎对来源于父系抗原的表达，另一方面是母体免疫系统对胚胎抗原的识别和反应。因此妊娠是成功的半同种移植过程，而流产则是移植排斥的结果。综合国内外文献，URSA的免疫机制涉及封闭抗体(blockingantibody，BA)、T辅助细胞1与T辅助细胞2的平衡(Th1/Th2balance)、自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)三方面。 国内外学者认同将免疫性反复自然流产分为二类，即同种免疫型RSA和自身免疫型RSA。孕期母体无法产生足够的保护性抗体或封闭抗体而致母体的免疫系统被激活，最终导致胚胎被排斥流产，这类患者属于同种免疫型RSA。自身免疫型RSA的机制迥然不同，该类患者体内抗磷脂抗体、抗核抗体等多种自身抗体增多，使胎盘血管容易发生血栓栓塞，导致胚胎缺血死亡。 对于同种免疫型URSA的治疗，目前国内外普遍采用主动免疫疗法(ActiveImmunotherapy，AIT)和被动免疫疗法(PassiveImmunotherapy，PIT)。1981年Talyor和Beer等创立主动免疫疗法——用丈夫或第三者的淋巴细胞作为抗原刺激母体产生足够的封闭抗体，封闭抗体与母体淋巴细胞或胎儿胎盘滋养叶抗原结合，阻碍母体免疫系统对胚胎的排斥，使胚胎形成免疫耐受，提高妊娠成功率，并被医学界广泛认可。 临床工作中，URSA患者密切关注两个问题：一是主动免疫的疗效、有效妊娠的成功率；二是主动免疫疗法对后代的影响。尤其后者，患者的担忧更甚。大量文献和临床资料显示主动免疫治疗可以明显提高妊娠的成功率，但是主动免疫治疗是否对胎儿、新生儿有负面影响，目前尚无定论。而且免疫疗法对婴幼儿的影响国内外少有报道。因此Scott提出关于免疫治疗对新生儿、儿童或更远期的影响的这类文章发表不多，他期待更多的临床医生参与这一项研究。 自然杀伤细胞(NatureKillerCell，NKC)细胞是子宫内膜、蜕膜中最丰富的免疫职能细胞，在母胎界面特殊的免疫调节中发挥至关重要的作用。1988年Gendron首次报道NK细胞的异常是导致自然流产的重要原因。越来越多的研究已证实NK细胞数量和功能的正常是维持正常妊娠的“枢纽”。正常妊娠时外周血NK细胞的毒性是降低的，而URSA患者早孕时外周血NK细胞的毒性和比例是显著上升的。URSA患者外周血NK细胞的水平与再次妊娠的成功率有明显的相关性。那么针对URSA的主动免疫治疗是否会影响外周血NK细胞呢? 临床工作中，临床医生不仅仅关注免疫治疗的疗效和对子代的影响，还关注如何采用适当的免疫指标来正确的评估URSA患者的免疫状态。目前临床上普遍采用封闭抗体评价URSA患者的免疫状态，但是封闭抗体的检测只是一种定性的检测。我们还发现有一部分经过免疫治疗后封闭抗体阳性的URSA患者再次妊娠时再次以流产而告终，提示我们不能把封闭抗体作为评价URSA患者免疫状态的唯一指标。Th1型细胞因子和Th2型细胞因子的检测也有助于患者免疫状态的评估，但是它们的检测技术要求高、需要多个因子的联合检查、费用高。因此我们是否可以通过外周血NK细胞的检测来辅助临床工作者、指导临床的治疗呢? 本课题在第一章通过追踪接受主动免疫疗法的URSA患者分娩的新生儿的体重、身长和头围，观察其在不同时期的生长发育，进而分析主动免疫疗法对新生儿、婴儿的近期影响，得到初步的结果，为临床工作者提供一定的依据。在第二章通过检测URSA未孕者(或怀孕者)主动免疫治疗前后外周血NK细胞在淋巴细胞中的比例，观察NK细胞的变化，进而分析主动免疫疗法对外周血NK细胞状态的影响，为临床免疫治疗的检测指标提供新的思路，辅助临床工作者全面评价主动免疫疗法的疗效。 资料和方法1.研究对象及分组在第一章：选取1999年1月至2005年3月在中山大学干细胞所接受主动免疫治疗的URSA患者的子代。纳入58例为研究对象，对其在不同生长发育的阶段进行追踪。其中男孩25例(早产儿3例)，女孩33例(早产儿1例)。 在第二章：选取2004年1月至2005年3月在本院优生遗传门诊就诊的34例不明原因的反复自然流产患者作为研究对象。根据有无怀孕，URSA患者分为主动免疫治疗未孕组(21例)和主动免疫治疗早孕组(13例)。选取同期40例健康妇女作为对照组。根据有无怀孕，对照组分为健康未孕组(20例)和健康早孕组(20例)。 2.研究方法第一章：观察主动免疫治疗后出生的新生儿在出生时、一月龄、一岁时的体重、身长、头围，描述他们的生长曲线图，判断生长发育的异常。新生儿的参考标准采用中国15城市不同胎龄新生儿出生体重值、身长值、头围值(1986-1987年)。婴儿的参考标准采用中国儿童出生-12月体格发育值(1987年)。 第二章：①抗丈夫淋巴细胞抗体的检测：采用补体依赖的细胞毒试验(complement-dependentcytotoxicity，CDC)②NK细胞亚群比例的测定：采用向全血中加入带有荧光素标记的抗-CD16抗体、抗-CD56抗体，经过处理后用流式细胞仪检测③淋巴细胞免疫的方法：采用小剂量的丈夫淋巴细胞对患者多次进行前臂皮内多处注射免疫 3.统计学处理全部数据采用SPSS11.0软件包进行统计处理。采用t检验或符号秩和检验。以P＜0.05为有统计学意义。