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结核病是流行于世界各地、严重威胁人和动物健康的一类人畜共患传染病。牛作为人类生产生活资料的重要来源,在结核病的传播过程中有着重要地位。本研究对分离自宁夏和新疆为主的西北部分地区规模化奶牛场中PPD阳性奶牛的疑似致病菌,采用多位点PCR进行菌种鉴定。利用MIRU-VNTR基因分型技术探究牛源分离株的基因型。经过药物敏感试验了解牛源分离株的表型耐药情况。通过对耐药基因测序,研究耐药菌株耐药基因突变与表型耐药和基因型之间的相关性。运用基因测序技术,探究西北五省非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobacterium,NTM)的种类,为西北地区控制牛结核病提供可靠的理论依据。采用酸性罗氏无淀粉培养基对82株结核病疑似致病菌的冻存菌株进行复壮和传代培养,最终成功复壮80株分离株。经16SrRNA初步鉴定,80株临床分离株均属于分枝杆菌属。通过MPT64基因和多位点PCR鉴定出30株MTBC,其中一株为宁夏株,其余29株分离株均为新疆株。采用比例法进行一线抗结核药物(异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇)敏感试验,20株(20/30,66.7%)结核分枝杆菌对四种一线抗结核药均敏感,10株(10/30,33.3%)对至少一种药物耐药,其中9株(30.0%,9/30)为耐多药(MDR)菌株。RIF单耐药率为3.3%(1/30),其他三种一线抗结核药(STR、INH和EMB)单耐药率均为0%。STR、INH、RIF和EMB的总耐药率分别为 30.0%(9/30)、30.0%(9/30)、33.3%(10/30)和 6.7%(2/30)。一线抗结核药相关耐药基因测序结果,10株耐药结核分枝杆菌中,rpoB1333位点的突变率为10.0%;katG1388位点的突变率为90.0%;inhA1812位点的突变率为70.0%,1714位点的突变率为10.0%;rrs932位点的突变率为10.0%;embB1333位点的突变率为90.0%;oxy R-ahp C和rps位点无突变。聚类分析15个MIRU-VNTR位点的基因分型结果,30株结核分枝杆菌聚集成四个基因群,呈现出18种VNTR基因型,其中14株为单一基因型,即一株菌代表一种基因型,占所有菌株的46.7%;16株(53.3%)聚集成4个基因簇,即C1、C2、C3、C4,每一簇分别包含3、2、5、6株分离株,菌株成簇率为46.7%。最大的基因群(均为新疆株)包含C3和C4基因簇,该基因群包含的菌株可能是新疆地区的优势菌株。将50株非结核分枝杆菌hsp65测序序列提交NCBI网站进行同源性比较发现6种NTM。不产色分枝杆菌(mycobacterium nonchromogenicum)32株(64.0%,32/50),罕见分枝杆菌(mycobacterium peregrinum)4 株(8.0%,4/50),鸟分枝杆菌(mycobacterium alvei)8 株(16.0%,8/50),恩氏分枝杆菌(mycobacterium engbaekii)3株(6.0%,3/50),偶发分枝杆菌(mycobacterium fortuitum)2株(4.0%,2/50),mycobacterium arupense 1株(2.0%,1/50)。牛群中流行的主要非结核分枝杆菌可能是不产色分枝杆菌。