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目的:探讨caveolin-1与CO2气腹后宫颈癌细胞生物学行为改变的相关性及作用机理的探讨。方法:通过分子生物学技术得到稳定高表达与低表达caveolin-1的宫颈癌细胞株,细胞功能检测其生长增殖、浸润转移能力的改变。结果:与对照组比较稳定高表达caveolin-1的宫颈癌细胞株其生长增殖能力、浸润转移能力是降低的,RNA干扰抑制caveolin-1表达的宫颈癌细胞株其生长增殖能力、浸润转移能力是增强的。结论: Caveolin-1在宫颈癌细胞中充当肿瘤抑制基因,腹腔镜CO2气腹后宫颈癌细胞的caveolin-1表达量下调,有可能增强其生长增殖能力、浸润转移能力。Caveolin-1(CAV1)基因全长扩增和真核表达载体的构建目的:克隆caveolin-1(CAV1)基因开放阅读框的cDNA序列,构建PEGFP-N1/CAV1的真核表达载体。方法:设计并合成带酶切位点及保护碱基的引物,RT—PCR法扩增caveolin-1基因,PEGFP-N1载体及caveolin-1基因片段进行限制性双酶切,电泳后回收切开的PEGFP-N1及caveolin-1片段,经连接反应后构建PEGFP-N1/CAV1真核表达载体。结果:PEGFP-N1/CAV1重组质粒经PCR电泳结果显示,得到一条在555bp的片段;重组质粒经限制性内酶切双酶切电泳结果证实,可释放一条在555bp的片段和4.8kbp的载体片段;重组质粒测序结果,经BLAST比对,100﹪符合。结论:成功构建了同时携带有绿色荧光蛋白及G418筛选位点的PEGFP-N1/CAV1真核表达载体复合体。过表达Caveolin-1基因的宫颈癌Hela细胞体外细胞功能研究目的:探讨过表达caveolin-1(CAV1)对宫颈癌Hela细胞生长增殖、浸润转移的影响。方法:脂质体法将质粒PEGFP-N1/CAV1转染宫颈癌Hela细胞,G418筛选出稳定高表达caveolin-1的克隆后,实时荧光定量PCR鉴定。流式细胞仪检测细胞周期,细胞生长曲线、、细胞集落形成实验检测细胞的生长能力;细胞侵袭实验、迁移实验、粘附实验检测细胞的浸润转移能力。结果:得到稳定高表达caveolin-1的克隆。流式细胞仪检测结果示,高表达caveolin-1使细胞阻滞在G0/G1期,增殖指数降低(P<0.05)。与对照组相比,转染组其细胞生长能力降低,细胞集落形成率降低(P<0.05);高表达caveolin-1使细胞的侵袭能力降低。迁移能力降低、粘附能力增强(P<0.05)。结论:高表达caveolin-1基因能够抑制宫颈癌细胞株Hela的生长增殖能力、浸润转移能力。RNA干扰宫颈癌细胞Hela Caveolin-1表达的体外研究目的:设计靶向caveolin-1(CAV1)基因的干涉片段,构建真核表达载体psilence4.1TM-CMV-neo- CAV1并转染宫颈癌细胞株,探讨siRNA抑制CAV1表达对人宫颈癌细胞生物学行为的影响。方法:根据GeneBank提供的CAV1基因核苷酸序列,设计并化学合成3对双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),瞬时转染宫颈癌细胞,通过实时荧光定量PCR检测各转染细胞组CAV1表达,筛选一个有效的siRNA序列。设计并合成能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)的DNA序列,构建CAV1基因的RNA干扰真核表达载体,稳定转染宫颈癌细胞, RT-PCR法鉴定宫颈癌细胞中CAV1基因的表达,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法、细胞集落形成实验检测细胞的生长能力;细胞侵袭实验、迁移实验、粘附实验检测细胞的浸润转移能力。结果:成功构建CAV1 RNA干扰真核表达载体psilence4.1 TM- CMV-neo- CAV1,稳定转染靶细胞后显著降低CAV1的表达,与对照组相比显著影响增强宫颈癌细胞的生长增殖能力(P<0.05),增强宫颈癌细胞的迁移能力、侵袭能力。结论:RNA干扰抑制宫颈癌细胞CAV1的表达显著促进其生长增殖能力、浸润转移能力。