lncRNA XR007366和XR009483在左归丸、右归丸诱导BMSCs软骨分化中的机制研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kkhaizi
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目的:前期长链非编码RNA(lncRNA)芯片结果显示:左归丸、右归丸含药血清诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化时,XR007366(7366)长链非编码RNA(lncRNA)下调,XR009483(9483)lncRNA上调。为了进一步验证芯片结果,通过过表达XR007366lncRNA和干扰XR009483lncRNA后左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化能力的变化,证明补肾中药能够通过lncRNA调控BMSCs的软骨分化。  方法:使用PacI线性化的腺病毒DNA转染HEK293细胞收取病毒,转染相应lncRNA,得到7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒。将P2代BMSCs分成8组:分别为BMSCs组,BMSCs+软骨诱导剂组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+空病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+7366lncRNA过表达腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸含药血清+9483lncRNA干扰腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+空病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+7366lncRNA过表达腺病毒组,BMSCs+软骨诱导剂+右归丸含药血清+9483lncRNA干扰腺病毒组。8组同时在相同环境培养21d。对8组培养后的细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(WB)检测Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达情况。  结果:Real-timePCR结果显示,BMSCs+软骨诱导剂+左归丸、右归丸含药血清后,Ⅱ型胶原mRNA含量明显高于单纯的BMSCs+软骨诱导剂(P<0.05);加入7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒,Ⅱ型胶原mRNA含量低于BMSCs+软骨诱导剂+左归丸、右归丸含药血清+空病毒组(P<0.05)。WB结果显示加入左归丸、右归丸含药血清组Ⅱ型胶原蛋白含量明显高于单纯的BMSCs+软骨诱导剂(P<0.05);加入7366lncRNA过表达腺病毒和9483lncRNA干扰腺病毒,Ⅱ型胶原蛋白含量明显降低(P<0.05)。  结论:左归丸、右归丸含药血清能够促进BMSCs软骨分化;过表达7366lncRNA和干扰9483lncRNA后,抑制左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化;说明7366lncRNA抑制左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化,9483lncRNA促进左归丸、右归丸含药血清诱导BMSCs软骨分化,与芯片结果一致。证明补肾中药左归丸和右归丸能够通过lncRNA调控BMSCs的软骨分化。
其他文献
目的:  通过收集已行肝穿活检术的住院慢性乙型病毒性肝炎患者的一般资料以及生化学、影像学等资料,筛选出与肝纤维化程度密切相关的指标,进行Logistic回归分析,再进一步建立