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目的:急性肺损伤的特征之一是严重的肺水肿,肺泡液体清除与肺水肿密切相关,增强肺泡液体清除,有助于肺水肿病情的减轻。在肺脏中,上皮钠通道(epithelial sodium channels,ENaC)是肺泡液体清除过程中的限速环节,是完成肺泡腔内钠水转运和水肿液清除的重要机制,因此调控ENaC对急性肺损伤患者的肺水肿清除至关重要。MicroRNAs(miRNAs)参与生命过程中一系列的重要进程,在体内代谢过程中起到多种调控作用。其余,它们还与某些肺病的发病机制相关。有研究已经证实了miRNAs在肺的稳态和发育中尤为重要,并已经证明了miRNAs参与了诸多肺疾如肺癌、慢性阻塞性肺疾病、急性呼吸窘迫综合症、急性肺损伤以及特发性肺纤维化等的发生。我们推测小鼠骨髓间充质干细胞条件培养液(conditioned media from bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC-CM)可能通过miRNAs改变肺泡上皮细胞ENaC的功能,从而对急性肺损伤的肺水清除发挥作用。本实验旨在探讨miRNAs与ENaC之间的关系,明确其是否影响Na~+的跨膜转运并探讨其可能的分子机制。研究方法:1、通过流式细胞术检测BMSC的纯度。2、免疫荧光技术鉴定肺泡二型上皮细胞(alveolar type II epithelial cells,ATⅡ)。3、通过酶标仪检测小牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)浓度来验证BMSC-CM对在体小鼠肺泡液体清除率的影响。4、通过CCK-8生存率实验将BMSC和ATⅡ进行transwell共培养来检测BMSC及BMSC-CM对ATⅡ细胞生存能力的影响。5、用荧光定量聚合酶链式反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot试验来确定BMSC-CM对ATⅡ细胞ENaC在mRNA和蛋白水平的影响。6、BMSC-CM作用于ATⅡ细胞,用RT-PCR检测其miRNAs的变化情况。7、用RT-PCR实验验证miRNAs的转染效率。8、采用尤斯灌流技术分析miRNAs对人肺远端上皮细胞系H441单层细胞短路电流的影响。9、用Western blot实验确定miRNAs对ATⅡ细胞ENaC蛋白水平的影响。10、用双荧光素酶报告基因检测miRNAs是否直接作用于ENaC。结果:1、BMSC和BMSC-CM能够提高ATⅡ细胞的生存率。2、BMSC-CM能够同时在蛋白和转录水平上提高α-,γ-ENaC的表达水平。3、BMSC-CM能够增强在体小鼠的肺泡液体清除率。4、BMSC-CM作用于ATⅡ细胞,miR-34c和miR-124的表达发生了显著变化。5、MiR-34c模拟物和miR-124模拟物有较高的转染效率。6、MiR-34c能够增强H441细胞阿米洛利敏感性电流,这表明miR-34c能够增强ENaC的活性。MiR-124使H441细胞阿米洛利敏感性电流减小,表明miR-124能够降低ENaC的活性。7、MiR-34c能够使γ-ENaC的蛋白表达增强,而miR-124能够降低α-ENaC的蛋白表达。8、MiR-124可以直接作用于α-ENaC,从而抑制其表达。结论:BMSC-CM可能通过miR-34c/miR-124调控ENaC的转录和翻译水平,从而对LPS诱导的急性肺损伤有修复作用。