目的:环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）是癌症化学疗法中最常用的药物之一,其应用通常会引起免疫抑制。免疫增强剂是癌症化疗中常用的辅助药物,现有的各类免疫增强剂存在一些副作用,未来其研究范围与种类在不断的扩大,而关于血红蛋白（Hemoglobin,Hb）的免疫调节作用已有较多的报道,但缺乏体内研究。实验室前期建立CTX致免疫抑制小鼠模型,初步证明了猪Hb（Porcine Hb,pHb）的免疫刺激作用,因此本文中进一步的研究了pHb在体内的免疫功能及其对免疫系统可能的作用机制,从而为pHb开发成为新型免疫增强剂的研究提供了思路。方法:1.沿用实验室原有的造模方法,建立CTX致免疫抑制模型,从小鼠自身的血和猪血中提取了Hb,从体重、免疫器官指数及白细胞总数,比较pHb、mHb（Mouse Hb,小鼠血红蛋白）免疫功能的差异。2.由于小鼠体重较轻,免疫器官萎缩严重,不利后续研究,因此优化了免疫抑制模型,采用80mg/kg CTX腹腔注射3天,然后腹腔注射1.4mg/kg pHb、10mg/kg pHb治疗,通过测定免疫器官指数、血液细胞数量、迟发型超敏反应、脾脏淋巴细胞计数及增殖、免疫器官组织病理观察,表明pHb的免疫功能。3.连续五天给正常小鼠注射1.4mg/kg pHb,记录小鼠体重变化,进行血常规和肝、肾功能的检测。4.将小鼠分为Control组、CTX+Nacl组,CTX+1.4mg/kg pHb组,每组三个生物学重复,处死小鼠取脾脏组织,提取RNA进行测序。结果:1.pHb和mHb对免疫抑制小鼠的体重、脾脏指数及白细胞总数具有显著提升作用,但pHb效果更佳,可能是由于pHb和mHb的氨基酸组成有所不同。由于胸腺萎缩严重,药物逆转作用较小,无法准确测定。2.优化模型较原有的模型免疫抑制程度轻,在该模型下,1.4mg/kg pHb可以提升免疫抑制小鼠的脾脏、胸腺指数,增加血液中白细胞、单核细胞和血小板数量,同时显著提高免疫抑制小鼠血清球蛋白含量、迟发型超敏反应、脾脏淋巴细胞数量及其增殖能力。此外,通过对脾脏、胸腺病理切片的观察得出pHb可以减轻CTX引起的免疫组织病变。3.1.4mg/kg pHb连续腹腔注射五天,小鼠未出现死亡,体重、血常规和肝功、肾功指标均在正常范围内。4.与CTX+Nacl组比较,CTX+pHb组小鼠脾脏组织208个基因发生变化,上调70个基因,下调138个基因。GO及KEGG通路分析表明涉及到丝氨酸肽酶活性,其相关机制可能是该肽酶活性将Hb降解产物珠蛋白水解为了氨基酸,从而进入到蛋白质及多肽合成途径中;在上调免疫基因中转铁蛋白受体1（Tfrc）、金属还原酶（steap3）与机体铁代谢、造血及免疫应答密切相关,涉及到Hb降解产物血红素,同时鞘氨醇激酶1（Sphk1）与免疫细胞增殖相关;下调免疫基因中热休克蛋白（Hspa1a）是氧化应激标志之一,因此pHb可能通过铁代谢、造血、鞘脂代谢及降低CTX的氧化损伤来发挥免疫作用。以上实验结果说明pHb增强了免疫抑制小鼠的免疫功能,改善了免疫器官病理损伤,且未对正常小鼠造成明显的毒性,同时初步表明pHb可能通过调控免疫抑制小鼠脾脏组织基因的表达对免疫功能产生作用,为今后研究pHb对免疫系统影响的作用机制提供思路,并为pHb开发成为一种新型的血液类免疫增强剂奠定基础。