目的:肺腺癌肿瘤细胞在原位增殖并向周围侵袭转移,在转移的过程中,微环境随着区域的不同而改变,为了适应多变的环境,肿瘤细胞的一些特征也随之改变。因此,转移肺腺癌肿瘤细胞除具有原位肿瘤细胞的特征外,还具有一些为适应环境变化而获得新的特征。但是,以往对这些细胞形态特点变化的分析多是基于传统的组织固定方法,而这些方法常常可以引起一些不可避免的问题,如人为操作或是化学试剂可以造成局部的血管收缩,血供丢失进而使组织缺氧。这些问题又往往影响对结果的判断以及分析,从而对结果的正确性产生影响。活体内冻结技术(in vivo cryotechnique),通过直接将液体冷冻剂倾倒在活体的动物器官上从而有效的避免由于人为操作,化学试剂等所带来的一些影响。为了避免传统的固定方法所带来的问题以及更好地分析结果,采用IVCT固定组织进而分析肺腺癌中转移细胞在不同环境下的行为特征。方法:Lewis肺癌细胞的培养;应用培养好的Lewis细胞制作动物模型;采用IVCT处理动物模型中的肺组织并将肺组织块进行石蜡包埋;将石蜡包埋的肺组织块切片染色,观察,记录实验结果。结果:1.应用浸泡固定然后脱水(immersion-fixation followed by dehydration)的方法制作的组织细胞标本呈现出血管受损,细胞皱缩,细胞间隙增大,细胞质密度增加,核深染等问题;应用IVCT制作的组织细胞标本中,细胞形态以及内部结构如细胞质,细胞核等清晰完整。2.在血管周围的原位肺腺癌肿瘤细胞和转移的肿瘤细胞都表达HIF-1α(缺氧诱导因子-1α),但在坏死区域HIF-1α阴性,且离血管越远HIF-1α信号越强。3.在纵隔淋巴结中,皮质淋巴窦和边缘窦中可见大量流动的肿瘤细胞,且HIF-1α呈现阴性。但是在淋巴滤泡中可见少量肿瘤细胞,并未有肿瘤的形成,且在该区域肿瘤细胞HIF-1α也呈现阴性。4.在原位肿瘤中,肿瘤组织对周围正常肺组织产生严重的挤压,正常组织结构破坏严重。在转移肿瘤中,肿瘤组织亦对周围正常脂肪细胞产生挤压,但是脂肪细胞形态结构清晰可见,并未遭到严重的破坏,且相比原位肿瘤,其挤压程度也较轻。5.在转移肿瘤中,浆细胞多在血管周围聚集,其中Ig M阳性细胞数量最多,Ig G-Fc阳性细胞其次,Ig A阳性细胞最少。结论1.通过和传统的固定方法比较,I VCT可以使组织细胞呈现出更完整清晰的细胞形态和结构,还可以防止细胞收缩过度而影响对结果的分析,是一种较为实用的组织固定方法。2.转移的肿瘤细胞和原位的肿瘤细胞一样,在血管周围多呈现出缺氧状态,由于肿瘤细胞生长速度过快,离血管较远的肿瘤细胞得不到充足氧分供给,往往形成经典的“血管-缺氧区域-坏死区域”结构区域。缺氧与肿瘤的发生发展密切相关。3.由于环境的改变或是肿瘤细胞自身成长以及转移的需要,在纵隔淋巴结中的肿瘤细胞不需要通过自身表达H IF-1α来适应环境或是满足自身的需求。纵隔淋巴结对于肺腺癌来说,是一个重要的转移途径。4.在不同的微环境下,肿瘤细胞的侵袭性有所不同。原位肺腺癌肿瘤细胞表现出强大的繁殖能力和侵袭性,相比之下,转移的肿瘤细胞其侵袭性可能较弱,或是还未完全体现。5.淋巴细胞在肿瘤的发展过程中起重要作用,他们可通过分泌抗体或是其他途径影响肿瘤的发展过程。其中分泌I g M的浆细胞可能起主要作用。