少根紫萍组织培养及膨胀浮萍开花诱导研究

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浮萍(Lemnaceae)属单子叶水生植物,通常生长在水面上或在水面以下,是世界上已知最小的开花植物。全球共5个属37个种,大部分浮萍植株仅由叶状体和根系组成,少部分品种没有根系。叶状体基部有两个分生组织囊,主要以出芽的方式无性繁殖。在特定条件下,浮萍也能进行有性繁殖,于分生组织囊处开花产生新生子代。浮萍繁殖速度快,在营养条件理想的情况下每2-7d即增长一倍。适应能力强,在世界各地几乎都有分布。浮萍对富含氮磷污水的耐受性强,并能高效的富集氮磷养分并转化为有机物,使其在水体净化以及通过生物技术进行遗传转化和种质创新方面有很大的应用潜力。组织培养是遗传转化的基础,开花诱导是杂交育种的基础,但是有关浮萍组织培养和开花诱导方面的研究目前仍局限在少数几个种,并且已知的浮萍品种其愈伤诱导效率和开花诱导率都相对较低。我们利用少根紫萍(Landoltia punctate DW2701)和膨胀浮萍(Lemna gibba SH0204)为实验材料,对前者进行组织培养和植株再生研究,对后者进行开花诱导研究,主要研究成果如下:(1)建立了高效的少根紫萍愈伤诱导和植株再生体系。结果表明,愈伤组织产生于叶状体分生组织囊处,并非伤口处,愈伤诱导最佳培养基为MS附加10g.L-1山梨醇,15.0mg·L-12,4-D,2.0mg·L-16-BA,在16h光周期下培养4周,所有外植体均能产生愈伤。愈伤增殖在培养基为WPM附加20g.L-1山梨醇,1.0mg·L-12,4-D,5.0mg·L-1NAA,0.5mg·L-1TDZ上并维持4周的继代周期。逐渐延长继代时间,可获得黄色胚性愈伤,在继代时间为10周时,胚性愈伤诱导率达到89.3±3.5%。植株再生效率在MS培养基添加5g.L-1蔗糖,10g.L-1山梨醇,1.0mg·L-16-BA上最佳,4周后即可得到完整再生植株,再生率达到82.1%,平均每个愈伤产生的再生植株数量为4.4且质量都很高;再生植株转接于液体Hoagland(1%蔗糖)营养液中培养1周后即可生根。本研究探索出的少根紫萍高效愈伤诱导和植株再生途径所需周期短,从接种外植体进行愈伤诱导到获得完整再生植株最短只需9周。(2)利用水杨酸(SA)诱导膨胀浮萍L.gbba SH0204开花,结果显示,在液体Hoagland培养基中加入适当浓度的SA对浮萍开花有显著的促进作用,在20μmol·L-1浓度下开花率达到39.37%。SA在诱导开花的同时,对浮萍叶片的生长有明显的抑制作用,在浓度为80μmol·L-1时,死亡率达到94.38%。本研究首次尝试了在固体培养基上诱导浮萍开花。结果表明,固体Hoagland培养基比液体培育基更有利于诱导开花,在20μmol·L-1SA浓度下,开花率超过45%,死亡率大幅降低;而且在固体培养基上,容易对开花植株进行跟踪和操作,因此,用固体培养基诱导开花比液体培养基更有应用价值。同时首次研究了其花粉粒活性和形态,发现该膨胀浮萍株系花粉粒活性较低,花粉粒呈近圆球形,表面有网状带刺纹饰。
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