目的:霉变是影响中药材品质的重要原因之一,对于药材霉变状况的鉴定已引起广泛的关注。传统的鉴定方法耗时较长,因而开发一种快速有效的高通量方法对霉菌进行快速的鉴定是非常必要的。本文旨在通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对霉变的药材进行快速的筛查,并通过鉴定药材上霉菌的种类来判定药材上的霉菌是否对人体有害,以便于对药材的质量进行进一步的控制。方法:本文运用MALDI-TOF MS结合N-烷基吡啶同位素季铵化反应(NAPIQ)对中药材中的甾体类成分进行了快速鉴定,通过比较所检测到的甾醇的种类来判定药材是否发生霉变;对于已经霉变的中药材,我们从中分离纯化出了多种霉菌,并以MALDI-TOF MS作为分析手段进行分析,通过核糖体蛋白质谱图结合了600-2000 Da范围内的高分辨率质谱图对霉菌的种以及亚种进行了鉴定,利用三种谱图相似度的计算方法对质谱图的重现性和特异性进行了考察,并将该方法运用到了实际样本的检测中。结果:本文运用NAPIQ衍生化反应提高了药材中甾体化合物的质谱响应。从新鲜的药材中只检测出植物甾醇,而从霉变的药材中获得了多种动物甾醇以及菌类甾醇,根据检测到的甾醇的种类可以判断药材是否发生霉变;随后从霉变的药材中分离纯化出多种霉菌并对其种类进行了进一步的确认,不同种属的霉菌在2000-20000Da范围内的核糖体蛋白质谱图具有较高的特异性,可以运用该质谱图对霉菌进行种间区分,对于不同的亚种,虽然其在2000-20000 Da范围内的核糖体蛋白质谱图相似度较高,但是它们在600-2000 Da范围内产生的代谢产物会有所不同,因而可以根据600-2000 Da范围内的高分辨率质谱图对不同亚种的霉菌进行有效的区分。本研究将核糖体蛋白质谱图与600-2000 Da范围内的高分辨率质谱图相结合,对霉菌的种以及亚种进行了快速有效的鉴定。结论:本文建立的MALDI-TOF MS结合NAPIQ衍生化反应方法能够对药材的霉变状况进行快速检测,为药材的质量控制提供一种新的研究思路;同时,霉变药材上霉菌种类的确定可以对药材的品质进行更加安全有效的控制,本文通过2000-20000 Da范围内的核糖体蛋白质谱图结合600-2000 Da范围内的高分辨率质谱图对霉变药材上霉菌的种以及亚种进行了快速有效的鉴定,谱图相似度计算方法的运用可以更加科学准确的对霉菌的质谱图进行匹配,提高鉴定结果的准确性,与文献报道的传统方法相比,该方法在霉菌的快速鉴定方面具有明显的优势。