乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）和寨卡病毒（Zika virus,ZIKV）均为蚊媒性黄病毒,侵入人体后会引发一系列相关的临床症状。目前,针对JEV已开发出四种疫苗,包括两种灭活苗和两种减毒活疫苗。然而,ZIKV于2013年才开始逐渐扩散至全球各地,目前尚未开发出已批准的疫苗用于人体临床,且没有特异性的抗病毒药物用于治疗ZIKV。超感染排除（Superinfection exclusion,SIE）是指预先感染的病毒（初级病毒）在细胞和/或机体水平上排除相同或密切相关病毒（次级病毒）引起二次感染的现象,通常发生在同源性较近的病毒之间。本研究首次证实了JEV和ZIKV之间存在超感染排除现象,细胞内高水平的JEV对ZIKV存在抑制作用,且鉴定出JEV对ZIKV的抑制发生在病毒复制和翻译阶段,并对超感染排除的分子机制进行了深入的研究,具体内容如下:1.JEV和ZIKV超感染排除现象的确立本研究在对JEV和ZIKV的感染条件进行摸索之后,通过荧光定量PCR和间接免疫荧光的方法,检测在同时感染了JEV和ZIKV的细胞中两种病毒的复制水平和感染情况,最终发现JEV和ZIKV之间存在超感染排除现象,高复制水平的JEV对ZIKV的抑制尤为明显。2.JEV对ZIKV的抑制无法恢复且是特异性的将ZIKV提前感染细胞,使其优先利用宿主资源并进行复制。对细胞内ZIKV的复制情况进行检测,结果发现ZIKV的复制依然无法恢复到单感染的水平。进一步检测发现JEV和非同源的伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）之间并无超感染排除现象,表明JEV对同源性较近的ZIKV的抑制是特异性的。3.JEV抑制ZIKV的复制和翻译阶段本研究对ZIKV生命周期各个阶段的变化分别进行了检测,吸附和侵入试验发现,在感染了JEV的细胞中,ZIKV能够正常侵入细胞,并不受JEV的影响;qPCR和Western blot检测发现JEV对ZIKV的RNA复制和蛋白质翻译阶段存在显著性抑制;空斑试验发现JEV对ZIKV的释放阶段无抑制作用。这些结果证实了JEV和ZIKV之间的超感染排除发生在ZIKV复制和翻译阶段。4.JEV NS2B蛋白介导超感染排除的分子机制将编码JEV单个蛋白的真核质粒分别转染HEK293T细胞,检测细胞内ZIKV RNA水平的变化,结果发现JEV NS2B蛋白剂量依赖性抑制ZIKV的RNA复制。对JEV NS2B蛋白进行分段表达后,发现JEV NS2B蛋白第46～103位氨基酸残基是介导超感染的关键区域,并进一步鉴定发现其第46～60位氨基酸残基对超感染排除是必需的,且与其蛋白酶活性有关,同时发现第56位精氨酸的突变使其丧失了抑制ZIKV的能力。