松材线虫病（Pine wilt disease）是由松材线虫（Bursaphelenchus xylophilus）引起的毁灭性的森林病害。一旦松树感染上松材线虫,最快在两个月内即可死亡。松材线虫繁殖型幼虫转型发育为扩散型幼虫是实现病害传播与流行的关键环节,在此阶段,扩散型三龄幼虫不断取食并积蓄脂肪到体内的脂滴,而在媒介昆虫体内扩散型四龄幼虫不取食,依靠储备于脂滴的脂肪生存,并依靠脂肪分解产生的能量驱使其从天牛体内溢出,侵染健康松树。因此,松材线虫生长发育过程中脂滴动态变化、脂肪酸组分和含量的变化与其侵染传播周期密切相关。在前期观察的基础上,系统研究松材线虫脂滴动态变化与脂肪酸组分及含量变化。本研究采用改良贝尔曼氏装置分别收集松材线虫成虫及繁殖型和扩散型两种形态的不同龄期幼虫,并参考模式生物秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）中的相关技术,采用4种脂滴染色方法比较并筛选观察脂滴动态的最佳方法;通过紫外分光光度计明确不同龄期松材线虫甘油三脂含量的差异;利用气相色谱质谱联用技术明确不同龄期松材线虫脂肪酸种类和含量。研究结果不仅可以为松材线虫扩散型幼虫形成机制提供参考,也为进一步揭示松材线虫的扩散传播机制奠定基础,同时为探索特异性的松材线虫病防控措施提供新的思路。本文主要研究结果如下:1、采用苏丹黑B、尼罗红、油红O染料的固定染色法量化松材线虫的脂肪,考虑染色方法的简易,时间的长短,染色的观察效果以及Image J软件图像处理后像素强度比较,苏丹黑染色脂滴像素为200×10¹⁷ mm²、尼罗红染色脂滴像素41.64×10¹²mm²、油红O染色脂滴像素52.12×10¹⁷ mm²、后置油红O染色脂滴像素83.85×10¹⁷mm²。苏丹黑染色脂滴平均像素强度最高,尼罗红染色脂滴平均像素强度最低。后置油红O染色方法是体现松材线虫的脂肪存储的最佳方法。脂滴的大小是脂肪含量的体现,在转型发育过程中松材线虫扩散型幼虫体内脂滴具有几个小脂滴融合成一个超大脂滴的现象。2、脂滴是甘油三酯等中性脂在细胞内储存的细胞器,紫外分光光度法结果表明,J4幼虫的平均甘油三酯含量为53 umol/L,J3幼虫的平均甘油三酯含量45.89 umol/L,成虫的平均甘油三酯含量为46.92 umol/L。扩散前期幼虫的平均甘油三酯含量为61.76umol/L,扩散期幼虫的平均甘油三酯含量为45.89 umol/L,繁殖期线虫的平均甘油三酯含量为49.18 umol/L。松材线虫繁殖型和扩散型的幼虫与成虫的甘油三酯含量有显著差异（p<0.05）。表明不同发育时期松材线虫的甘油三酯含量存在差异,且甘油三脂含量与松材线虫转型发育密切相关。3、气相色谱质谱联用结果表明,松材线虫繁殖型和扩散型的幼虫与成虫的脂肪酸组分涵盖了C11～C22的23种,J2、J3、J4和成虫的饱和脂肪酸相对含量分别为（35.04±0.62）%、（25.95±0.58）%、（41.42±0.67）%、（32.08±0.62）%;单不饱和脂肪酸相对含量分别为（0.80±0.01）%、（7.04±0.05）%、（18.88±0.03）%、（13.56±0.02）%;多不饱和脂肪酸相对含量分别为（2.03±0.05）%、（5.26±0.05）%、（53.8±0.27）%、（17.77±0.21）%。DL3、DL4阶段的饱和脂肪酸相对含量分别为（40.48±0.40）%、（25.65±0.65）%,单不饱和脂肪酸相对含量分别为（3.65±0.07）%、（4.24±0.06）%,多不饱和脂肪酸相对含量分别为（15.04±0.15）%、（0.76±0.13）%。松材线虫繁殖型和扩散型的幼虫与成虫的各脂肪酸相对含量有显著差异（p<0.05）。各脂肪酸组成相似,但在相对含量上却有显著差异。表明不同发育时期松材线虫的脂肪酸组成在种类和相对含量上均存在一定的差异,且脂肪酸变化特征与松材线虫转型发育、寄主转移和能量消耗等方面密切相关。上述研究结果明确了松材线虫不同发育时期脂滴的动态变化、脂肪组分和含量分析,由此推测,脂滴变化与脂肪酸变化可能在松材线虫幼虫转型发育、寄主转移、能量消耗等方面具有重要的作用。