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一、研究背景肺癌是我国乃至全世界最常见的恶性肿瘤之一,其中非小细胞肺癌占肺癌总数的85%。由于吸烟人数的增多以及环境污染的加剧,肺癌的患病率、死亡率整体呈上升趋势,探索肺癌的有效治疗方法具有重要意义。氟苯达唑是一种经FDA批准的驱虫药,属于苯并咪唑家族,通过与寄生虫的微管蛋白结合发挥作用,具有良好的驱虫效果。近年来研究结果显示,氟苯达唑是一种潜在的抗肿瘤药物,可以抑制肿瘤细胞增殖,包括骨髓瘤、白血病、神经胶质瘤、乳腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、食管鳞癌等,但尚未对非小细胞肺癌进行研究。本研究拟通过非小细胞肺癌A549、H460细胞,研究氟苯达唑对非小细胞肺癌的作用,并探讨其作用机制。二、研究方法1、不同浓度的氟苯达唑(浓度为 0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4μmol/L)处理非小细胞肺癌A549、H460细胞48h,采用CCK-8法检测细胞活力。2、选用2μmol/L 氟苯达唑处理 A549、H460 细胞 12、24、48h,Western Blot检测自噬相关蛋白p62、LC3水平。3、带双标荧光的腺病毒(HBAD-mRFP-GFP-LC3)转染A549、H460细胞,分为空白对照组、氟苯达唑处理组、氟苯达唑和羟氯喹联用组、羟氯喹组及雷帕霉素组处理细胞,荧光生物显微镜拍照并分析细胞内自噬流。4、氟苯达唑(浓度为 0、0.125、0.5、2μmol/L)处理 A549、H460 细胞 48h后,Annexin V-FITC/PI染色并通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。三、研究结果1、氟苯达唑对A549、H460细胞有抑制作用,并呈剂量依赖关系,浓度越高时,抑制越明显。2、2μmol/L氟苯达唑处理A549、H460细胞12、24、48h后p62减少,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高,提示细胞内自噬水平升高。3、mRFP-GFP-LC3转染细胞显示空白对照组自噬水平较低,氟苯达唑组和雷帕霉素组处理后荧光融合以红色荧光为主,提示自噬流活化,氟苯达唑与羟氯喹共同作用时,绿色荧光表达量较氟苯达唑组升高,荧光融合后呈红黄相间并且黄色荧光居多。羟氯喹以黄色荧光为主,意味着自噬流阻滞。4、不同浓度的氟苯达唑处理A549、H460细胞48h后,细胞凋亡率较对照组升高,药物浓度越高,细胞凋亡率越高。四、结论我们通过体外实验证明氟苯达唑能抑制非小细胞肺癌细胞的增殖,降低A549、H460细胞活力。进一步研究发现氟苯达唑可上调LC3 Ⅱ/Ⅰ的表达,下调p62水平,活化A549、H460细胞内自噬流,促进细胞自噬的发生。氟苯达唑还可以诱导A549、H460细胞凋亡,并且与药物浓度成正相关。因此,氟苯达唑有可能是一种潜在的肺癌治疗药物。