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目的在高血压肾损害中,氧化应激影响足细胞凋亡和节段性肾小球硬化,从而影响肾小球的通透性,影响肾脏中近端肾小管和肾小球系膜细胞的上皮-间质转化,促进肌成纤维细胞的积聚,导致促纤维化因子和ECM蛋白分泌过多,引起肾小管间质细胞外基质的重塑。Sestrin2(SESN2)蛋白是一类在进化上高度保守的应激诱导蛋白,当细胞处于应激状态下其表达上调,对氧化应激起保护作用。第一部分实验通过单侧肾切除及微渗透泵灌注血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)造成高血压肾损害模型,运用潜阳育阴颗粒干预高血压肾损害,观察干预后血压、心率、血尿素氮、尿ACR等变化及肾脏病理变化,观察潜阳育阴颗粒对Sestrin2信号通路在高血压肾损害氧化应激的影响。第二部分临床研究通过观察高血压肾损害患者血清Sestrin2的变化,探讨潜阳育阴颗粒在高血压肾损害患者抗氧化应激作用。方法一、实验研究1)通过单侧肾切除及微渗透泵灌注Ang Ⅱ造成自发性高血压大鼠(SHR)肾损害模型,WKY作为对照组。2)WKY作为正常对照组,造模后的SHR按收缩压随机分为4组,分别为模型组(Model)、缬沙坦组(Valsartan)、潜阳育阴颗粒高剂量组(QYYYG(H))、潜阳育阴颗粒低剂量组(QYYYG(L)),灌胃给药,每日一次,连续8周,观察潜阳育阴颗粒对造模后SHR体重、血压、心率、血尿素氮、微量白蛋白与肌酐比值以及大鼠肾脏组织形态学HE染色、纤维化程度Masson染色影响。3)通过免疫组化(IHC)、蛋白质免疫印迹(WB)、实时荧光定量PCR(RT-PCR)观察潜阳育阴颗粒对Sestrin2-AMPK-mTOR信号通路、Sestrin2-Nrf2-HO-1 信号通路、Sestrin2-NOX4信号通路蛋白表达在氧化应激中影响。二、临床研究通过观察高血压早期肾损害患者血清Sestrin2治疗前后的变化,探讨潜阳育阴颗粒在高血压早期肾损害患者中抗氧化应激作用。1)两组一般人口学资料:性别、年龄、身高、体重、腰围、BMI等比较;2)潜阳育阴颗粒对血清谷丙转氨酶(ALT)的影向;3)潜阳育阴颗粒对尿微量白蛋白肌酐比值(ACR)的影响;4)潜阳育阴颗粒对血肌酐(Scr)的影响;5)潜阳育阴颗粒对收缩压(SBP)的影响;6)潜阳育阴颗粒对舒张压(DBP)的影响;7)潜阳育阴颗粒对血清Sestrin 2的影响;8)潜阳育阴颗粒对血清ROS的影响;结果一、实验研究1)单侧肾切除及微渗透泵灌注Ang Ⅱ,造模2周后,SHR组大鼠收缩压升、心率升高明显,SHR大鼠血BUN、尿ACR升高,单侧肾切除及微渗透泵灌注Ang Ⅱ造模2周后,SHR肾脏组织病理显示动脉管壁增厚,玻璃样变性,部分肾小球毛细血管基底膜缺血性皱缩和缺血性硬化,肾小球萎缩,肾间质多灶状炎性细胞浸润,纤维化明显。2)潜阳育阴颗粒可以降低造模后SHR组大鼠收缩压,改善造模后SHR组大鼠舒张压,潜阳育阴颗粒可以改善造模后SHR组大鼠BUN、降低造模后SHR组大鼠ACR,潜阳育阴颗粒可以改善造模后SHR组大鼠肾脏组织病理损伤,减少炎症浸润,改善肾脏动脉血脉管壁增厚,减轻玻璃样变性,改善肾小球毛细血管基底膜缺血,最终减少肾脏组织纤维化。3)在免疫组化中,潜阳育阴颗粒高剂量组可促进SESN2蛋白表达,上调AMPKα磷酸化水平表达,进而抑制mTOR磷酸化水平,进一步抑制下游蛋白HIF-1α表达。4)在免疫组化中,潜阳育阴颗粒高剂量组可促进SESN2蛋白表达,上调Nrf2蛋白表达水平,进一步上调下游蛋白HO-1蛋白表达。5)在免疫组化中,潜阳育阴颗粒高剂量组可促进SESN2蛋白表达,抑制NOX4蛋白表达水平。6)在western blot实验中,通过SESN2-AMPK-mTOR-HIF-1α蛋白表达,潜阳育阴颗粒可能具有促进SESN2蛋白表达,上调AMPK磷酸化,同时抑制mTOR蛋白磷酸化,最后抑制下游分子HIF-1α蛋白表达。7)在western blot实验中,通过SESN2-Nrf2-HO-1蛋白表达,潜阳育阴颗粒高剂量组可促进SESN2蛋白表达,上调Nrf2蛋白表达,同时促进下游分子HO-1蛋白表达。8)在western blot实验中,通过Sestrin2-NOX4蛋白表达,潜阳育阴颗粒高剂量组可促进SESN2蛋白表达,抑制NOX4蛋白表达。9)潜阳育阴颗粒高剂量组干预后可上调SENS2基因表达水平,潜阳育阴颗粒高、低剂量组干预后可显著抑制HIF-1α基因表达水平,潜阳育阴颗粒低剂量组干预后可显著上调HO-1基因表达水平,潜阳育阴颗粒高剂量及低剂量组干预后可显著抑制NOX4基因水平表达。二、临床研究1)潜阳育阴颗粒干预12月后,治疗组(潜阳育阴颗粒组)与对照组比较:收缩压、舒张压、心率、血肌酐、eGFR、尿ACR等指标无明显差异(P>0.05)。2)治疗前,两组血清SESN2浓度组间比较无显著差异(P>0.05),治疗后,两组血清SESN2浓度组间比较无显著差异(P>0.05),治疗前,两组血清ROS浓度组间比较无显著差异(P>0.05),治疗后,两组血清ROS浓度组间比较无显著差异(P>0.05),潜阳育阴颗粒干预12月后,对照组及治疗组SESN2、ROS浓度升高,两组组内比较有显著差异(P<0.01)。治疗前后两组浓度SESN2差值无统计学意义(P>0.05)。结论:1)单侧肾切除及微渗透泵灌注Ang Ⅱ可以建立SHR高血压肾损害模型。2)潜阳育阴颗粒干预后可以改善SHR高血压肾损害,通过Sestrin2-AMPK-mTOR-HIF-1α蛋白表达、Sestrin2-Nrf2-HO-1蛋白表达以及Sestrin2-NOX4蛋白表达改善大鼠肾脏局部氧化应激反应。3)通过临床研究,提示Sestrin2及ROS可作为反映高血压早期肾损伤氧化应激的指标。