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[目的]贝类是一种高价值的商品,其口感鲜美,营养丰富,是一种食物资源也是沿海工业的支撑产品。但随着我国近海城市工农业的迅速发展和人口密度的增长,每年向海洋排放的废弃物也日益增多。而贝类属于滤食性动物,常养殖在近海滩涂,一旦遇到水质污染,其安全卫生问题较难回避。因此人们在享受美味营养时,也面临着影响安全健康的风险。尤其是生食贝类产品的消费者,极易引起腹痛、腹泻、呕吐等症状,严重时甚至危及生命。因此建立水产品养殖环境的监测管理体系势在必行。本论文拟通过构建污染指示因子大肠埃希氏杆菌DNA rep-PCR指纹图谱库,讨论最新的微生物源示踪(MST)方法用于贝类食品及其养殖水环境安全溯源的可行性。为建立水产品及其养殖环境的监测管理体系提供理论基础,从而为实现“从池塘到餐桌”的安全生产[方法]全文以象山近岸海域为实验海域,确定蟹钳港、大目涂和西沪港周围的畜禽养殖场为已知污染来源的采样点,用麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂等选择性培养基大量分离不同畜禽粪便中的疑似大肠埃希氏杆菌菌株,并通过一系列生化反应鉴定得到大肠埃希氏杆菌。用基因组提取试剂盒提取各菌株的基因组DNA后,选用4种引物进行rep-PCR实验。在水平凝胶电泳的检测下,得到污染指示因子大肠埃希氏杆菌的rep-PCR指纹图谱。通过Quantity One、SPSS等软件的聚类分析与正确判别率评估,建立东海滩涂已知来源大肠埃希氏杆菌rep-PCR指纹图谱库,并进行图谱库的稳定性评价。基于指纹图谱库,对分离于东海滩涂贝类及养殖水域的未知来源大肠埃希氏杆菌进行多维尺度(MDS)的分析,讨论MST方法用于贝类食品及其养殖水环境安全溯源的可行性。[结果]共采集得到粪便样品100份,贝类样品15份和养殖水样3份；分离后得到猪源、鸭源、鹅源和鸡源疑似大肠埃希氏杆菌数分别为60、68、74和70株；经纯化鉴定后的菌株数分别为50、54、58和54株,得到鉴出率为猪源E.coli 83.3%、鸭源E.coli 79.4%、鸡源E.coli 77.1%、鹅源E.coli 78.4%。对指纹图谱稳定性评价得出：在水平凝胶电泳的条件为80V,1.5%琼脂糖凝胶,4℃下电泳4hrs后,得到指纹图谱的最低相似系数为0.98；同时实验条件对指纹图谱的稳定性影响很小,其最低相似系数为0.95；菌株时空稳定性的评价得出,传代培养在10代以内,对图谱稳定性影响不大,其最低相似系数为0.96。rep-PCR指纹图谱的构建得出：聚类分析后,REP-PCR指纹图谱有31种聚类数,鸡源、猪源、鸭源和鹅源大肠埃希氏杆菌的指纹图谱正确判别率(RCC)值分别为90.7%、66%、77.8%、55.2%,平均正确判别率(ARCC)值为72.4%；BOX-PCR指纹图谱有42种聚类数,鸡源、猪源、鸭源和鹅源大肠埃希氏杆菌的指纹图谱RCC值分别为74.1%、80%、92.6%、94.8%,ARCC值为85.4%；ERIC-PCR指纹图谱有33种聚类数,鸡源、猪源、鸭源和鹅源大肠埃希氏杆菌的指纹图谱RCC值分别为64.8%、80%、81.5%、75.9%,ARCC值为75.6%；(GTG)5-PCR指纹图谱有38种聚类数,鸡源、猪源、鸭源和鹅源大肠埃希氏杆菌的指纹图谱RCC值分别为77.8%、90%、85.2%、84.5%,ARCC值为84.4%。基于上述指纹图谱库对分离于东海滩涂贝类及养殖水域的未知来源菌株进行判别分析,正确判别菌株12株,未能判别菌株3株。[结论]所建立的粪便污染指示因子大肠埃希氏杆菌的分离鉴定方法可靠有效,为指纹图谱库的建立提供大量菌株。rep-PCR指纹图谱具有较好的稳定性,分离得到的大肠埃希氏杆菌在短期内具有较好的时间稳定性,从而保证了图谱库的稳定性。聚类分析方法和MDS分析方法对未知菌株较好的判别结果,为贝类食品安全微生物源示踪体系的建立提供了可行的方法。