【摘 要】
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目的:研究长白山区东北桤木的化学成分,筛选出具有抗弓形虫的活性成分,运用网络药理学及分子对接对其有可能的靶点和通路进行预测,筛选具有潜在抗弓形虫作用的天然化合物,为研究东北桤木抗弓形虫活性药效物质基础及合理开发利用提供理论基础。方法:1.将东北桤木干燥药材进行粉碎,选用90%乙醇回流提取,提取物减压蒸馏得到乙醇提取物浸膏。采用溶剂梯度萃取法,利用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次进行萃取,减压蒸馏得到
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目的:研究长白山区东北桤木的化学成分,筛选出具有抗弓形虫的活性成分,运用网络药理学及分子对接对其有可能的靶点和通路进行预测,筛选具有潜在抗弓形虫作用的天然化合物,为研究东北桤木抗弓形虫活性药效物质基础及合理开发利用提供理论基础。方法:1.将东北桤木干燥药材进行粉碎,选用90%乙醇回流提取,提取物减压蒸馏得到乙醇提取物浸膏。采用溶剂梯度萃取法,利用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次进行萃取,减压蒸馏得到三种萃取物浸膏。2.选择东北桤木的乙醇提物及各萃取物对感染刚地弓形虫模型小鼠进行研究,检测血清中谷氨酸转氨酶（AST）、天冬氨酸转氨酶指标（ALT）,肝脏中谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）指标以及实验小鼠肝脾指数,筛选东北桤木的抗弓形虫活性部位。3.选择活性较好且毒性较低的东北桤木二氯甲烷与乙酸乙酯萃取部位,运用多种色谱分离技术进行化学成分的分离,采用光谱学技术手段进行单体化合物的结构鉴定。4.利用噻唑蓝比色法（MTT法）,检测东北桤木中分离得到的单体化合物的抗弓形虫作用,通过人胃上皮细胞（GES-1细胞）和感染刚地弓形虫后GES-1细胞的IC50值,计算出选择性指数（SI）。5.基于网络药理学对东北桤木活性成分与弓形虫靶点进行预测。利用分子对接对东北桤木活性成分与热休克蛋白70（Tg HSP7）蛋白靶点进行结合,确定抗弓形虫病活性较好且对接效果较好的活性成分。结果:1.东北桤木体内活性实验结果显示,东北桤木降低模型小鼠血清中ALT、AST的活性,能显著提高小鼠体内GSH含量,降低MDA含量。与螺旋霉素相比,东北桤木不会引起肝指数的显著降低。2.在东北桤木二氯甲烷及乙酸乙酯萃取部位的化学成分研究过程中,分离得到20个已知化合物和1个新化合物,利用核磁共振氢谱和碳谱等光谱分析手段确定了化合物结构,分别为:（9S）-9-hydroxy-9-[（2-hydroxyphenyl）methoxy]-nonanoic acid methyl ester（1）、颤杨甙（2）、7-水杨酰颤杨苷（3）、肉桂酸（4）、香草酸（5）、4-羟基苯甲酸（6）、原儿茶酸（7）、原儿茶酸甲酯（8）、异香草酸（9）、柚皮素（10）、异樱素（11）、木犀草素（12）、黄芩素（13）、山柰酚（14）、二氢山柰酚（15）、山柰甲黄素（16）、鼠李柠檬素（17）、二氢山柰甲黄素（18）、秦皮乙素（19）、东莨菪亭（20）、β-胡萝卜苷（21）。其中9个苯酚类化合物（1-9）;9个黄酮类化合物（10-18）;2个香豆素类化合物（19,20）;1个甾体类化合物（21）。分离得到的化合物1为苯酚类的新化合物。3.体外实验结果显示,化合物4,5,8,12-14,17,20对未感染宿主的IC50值均高于螺旋霉素,其中化合物4,12,13,21的SI均优于螺旋霉素,说明东北桤木具有比螺旋霉素更好的抗弓形虫活性且毒性较低。4.网络药理学结果显示东北桤木中黄酮类成分与弓形虫的许多靶点有关,可作为治疗弓形虫的潜在药物;AKT1,EGFR,JUN,STAT3和TLR4等是其蛋白质相互作用网络中的关键靶标;与弓形虫相关的途径包括NF-κB信号传导,Toll样受体信号传导以及JAK-STAT信号传导等。通过分子对接结果分析,化合物12,13与Tg HSP70的对接效果较好,进一步验证化合物12,13抗弓形虫活性较好。结论:本研究从东北桤木中分离得到20个已知化合物以及一个新化合物1,所得化合物均为首次从东北桤木中分离得到化合物。其中化合物2,3,5-9,19-21为桦木科首次分离得到。体内外实验中东北桤木表现出一定的抗弓形虫活性且细胞毒性较小,利用网络药理学和分子对接研究东北桤木治疗弓形虫病的作用机制,初步揭示了东北桤木可能通过的成分、靶点及信号通路,以达到治疗弓形虫的作用,为其深入研究提供了基础。本研究增加了我们对东北桤木化学成分的了解,为东北桤木的开发与应用提供了可靠的理论依据。
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