静脉血栓栓塞症患者D-二聚体检测方法的研究

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目的:血浆D-二聚体(D-dimer)是交联的纤维蛋白在纤溶酶水解的作用下产生的可溶性降解终产物,是反映机体内高凝状态、血栓形成及纤溶活性的重要标志物。临床上多采用酶联免疫吸附法、免疫比浊法等检测血浆D-二聚体的含量。D-二聚体的抗原决定簇存在于含有D区的交联的纤维蛋白降解产物中,免疫比浊法检测D-二聚体时,单克隆抗体不仅特异地识别了D-二聚体的抗原决定簇,还和高分子量的交联纤维蛋白降解产物有交叉反应。也就是说临床中免疫比浊法测得的是交联的纤维蛋白降解产物的总蛋白量,并不是单纯D-二聚体的量。本研究将采用蛋白免疫印迹技术(Western blot)及免疫比浊法检测血浆D-二聚体的表达情况。方法:选取大连医科大学附属第一医院呼吸科2009年至2010年期间住院确诊静脉血栓栓塞症(Venous thromboembolism,VTE)患者50例作为VTE组;选取无血栓病史及家族史的门诊健康体检者50例为健康对照组;选取晚期妊娠者(妊娠>28周)50例为妊娠组;选取同期肿瘤内科住院确诊恶性肿瘤、无静脉血栓血栓症的患者50例为恶性肿瘤组,以上每例患者分别取血浆一份,采用蛋白免疫印迹技术(Western blot)、免疫比浊法检测VTE组、妊娠组及恶性肿瘤组的血浆D-二聚体的表达情况,并与健康对照组进行对比。结果:1.Western blot检测结果显示,血浆D-二聚体在VTE组(1.2015±0.8829)的表达明显高于健康对照组(0.6479±0.3679),(Z=-2.686,P=0.007),差异具有显著性。妊娠组(0.9345±0.6148)高于健康对照组(t=-2.045,P=0.046),差异有统计学意义。恶性肿瘤组(1.1812±1.0340)高于健康对照组(Z=-2.058, P=0.040),差异有统计学意义。VTE组与妊娠组、恶性肿瘤组比较,检验统计量分别为Z=-0.844、Z=-0.038,P值分别为P=0.399, P=0.970,差异无统计学意义。Western blot检测VTE患者D-二聚体的灵敏度是52%,特异度是92%。血浆高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP在VTE组(4.2263±2.4011)的表达高于健康对照组(2.0345±0.7473)(Z=-4.656, P=0.000),差异具有显著性。妊娠组(3.0790±1.7069)高于健康对照组(Z=-2.044, P=0.041),差异有统计学意义。恶性肿瘤组(3.2498±2.1437)高于健康对照组(Z=-2.052, P=0.040),差异有统计学意义。VTE组高于妊娠组及恶性肿瘤组,检验统计量分别为Z=-1.965、Z=-1.998, P值分别为P=0.049, P=0.046,差异有统计学意义。Western blot检测VTE患者血浆高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP的灵敏度是58%,特异度是80%。D-二聚体与高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP的比值, VTE组(0.3318±0.1284)高于健康对照组(0.2640±0.0882)(Z=-1.980, P=0.048),差异有统计学意义。妊娠组(0.3955±0.0715)高于健康对照组(Z=-4.038, P=0.000),差异具有显著性。恶性肿瘤组(0.4048±0.0867)高于健康对照组(Z=-4.215, P=0.000),差异具有显著性。妊娠组、恶性肿瘤组高于VTE组,检验统计量分别为t=-2.343、t=-2.053, P值分别为P=0.025, P=0.044,差异有统计学意义。Western blot检测VTE患者血浆D-二聚体与高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP的比值,其灵敏度是50%,特异度是74%。2.免疫比浊法检测结果显示,血浆D-二聚体在VTE组中的浓度(468.04±374.17ng/ml)高于健康对照组(137.18±183.41ng/ml)(Z=-4.708,P=0.000),差异具有显著性。妊娠组(257.21±201.95ng/ml)高于健康对照组(Z=-2.876,P=0.004),差异具有显著性。恶性肿瘤组(299.42±432.50ng/ml)高于健康对照组(Z=-2.902,P=0.004),差异具有显著性。VTE组高于妊娠组及恶性肿瘤组,检验统计量分别为Z=-2.351、Z=-2.508,P值分别为P=0.019, P=0.012,差异有统计学意义。免疫比浊法检测VTE患者血浆D-二聚体的灵敏度是60%,特异度是92%。结论:1.通过蛋白免疫印迹技术证实,临床常用的免疫比浊法检测血浆D-二聚体水平,其单克隆抗体识别的蛋白中含有D-二聚体抗原决定簇的高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP占主要部分。2.静脉血栓栓塞症患者血浆高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP高于妊娠组和恶性肿瘤组,血浆D-二聚体与高分子量交联纤维蛋白降解产物FDP的比值在妊娠组和恶性肿瘤组高于静脉血栓栓塞症组,可能为三组患者的鉴别提供一项敏感和特异的指标。
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