干细胞对重症急性胰腺炎大鼠肠屏障保护作用的实验研究

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【目的】本文旨在通过建立大鼠重症急性胰腺炎肠屏障损伤的动物模型,检测观察血清淀粉酶(AMY)、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清二胺氧化酶(DAO)水平,并观察胰腺、小肠病理形态及超微结构的改变、小肠组织AQP-1蛋白表达的情况以及MSCs治疗后上述指标的变化,探讨SAP时肠黏膜屏障变化的机理,观察MSCs对重症急性胰腺炎肠黏膜屏障的保护作用。从而寻求应用MSCs治疗重症急性胰腺炎并发肠黏膜屏障功能障碍的理论依据。【方法】将54只雄性SD大鼠按随机数字表分成3组:SO组(假手术组)、SAP组(重症急性胰腺炎对照组)、SAP+MSCs组(间充质干细胞干预组),每组又分6、12、24、48h4个时间点,每个时间点有6只大鼠。采用4%牛磺胆酸钠胆胰管逆行注射制备SD大鼠重症急性胰腺炎动物模型(0.1ml/100g),MSCs组于模型制成后lh阴茎背静脉注射MSCs(1*106个/100g),SO组开腹后仅轻轻翻动胰腺和肠管后即关腹。在各组相应处理后,分别6、12、24、48h对各组动物采血行血清AMY、TNF-α、DAO测定,取小肠组织部分行快速冰冻,荧光显微镜下观察CM-DiI阳性细胞;小肠组织测定组织中AQP-1蛋白表达的情况,并于光镜下行胰腺和小肠组织病理学及超微结构改变的观察。【结果】1.SAP组大鼠各时间点血清AMY、TNF-α、DAO水平高于假手术组(P<0.05)。与SAP组比较,SAP+MSCs组6h后各时间点血液TNF-α显著下降(P<0.05),12、24h两个时间点DAO活性均显著降低(P<0.05)。2.各时间点的SAP大鼠其胰腺及肠黏膜屏障功能损伤的程度存在区别,随着时间的延长(从6h到24h),胰腺及肠黏膜病理组织评分较正常明显升高(P<0.05)。MSCs治疗后于各时间点病理评分仍高于假手术组(P<0.05),但较SAP组有显著降低(P<0.05)。SAP+MSCs组小肠组织荧光显微镜下观察可见CM-DiI阳性细胞。免疫组化结果显示SAP组于6h后各时间点AQP-1阳性表达弱于SO组,尤其在造模后24h表达最弱;而SAP+MSCs组于12h后各时间点的小肠AQP-1表达较SAP组有所增强。【结论】1.采用胆胰管逆行注射4%牛磺胆酸钠可成功制备大鼠SAP合并肠屏障损伤模型,此实验方法稳定,重复性好。2.全骨髓差异贴壁法能够获得较高纯度的MSCs。3.重症急性胰腺炎能够引起大鼠全身性炎症反应,移植的MSCs能够迁移并定居到受损肠道,抑制TNF-α的释放,增加AQP-1的表达量,降低肠黏膜通透性,促进肠上皮修复,维护肠黏膜屏障的完整性。
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