目的:研究玻璃化冷冻对小鼠成熟卵母细胞形态、功能和基因表达的影响,为卵母细胞冷冻保存的有效性和安全性提供实验数据和理论依据。方法:小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜性腺激素(h CG)促排卵,得到成熟的小鼠卵母细胞,将其分为新鲜组和冷冻组,利用两种玻璃化冷冻方法冷冻小鼠成熟卵母细胞,与新鲜组比较冷冻组卵母细胞复苏后的形态、存活率和超微结构;将新鲜组和冷冻复苏后的卵母细胞进行体外受精,统计受精率和卵裂率;将新鲜组和冷冻复苏后的卵母细胞进行单细胞转录组测序,比较差异表达基因并进行生物信息学分析。结果:1.显微镜下观察,玻璃化冷冻组与新鲜组卵母细胞均为圆形,部分冷冻组卵母细胞胞浆内有少量粗颗粒,二者间形态上没有显著性差异。第一种玻璃化冷冻卵母细胞复苏后存活率为78.3%,改进后第二种玻璃化冷冻法卵母细胞复苏后成活率为89.9%。2冷冻组和新鲜组卵母细胞经过扫描电镜观察,均可见完整卵母细胞结构,新鲜组卵母细胞表面可见较多突起。透射电镜观察,两组均可见清晰的细胞核、细胞质,胞浆中可见线粒体、高尔基体和内质网,冷冻组与新鲜组比较卵母细胞胞质较疏松,空泡结构多见,皮质颗粒略少,分布不均匀。3玻璃化冷冻组卵母细胞体外受精率为38.82%,卵裂率为32.94%,囊胚率为18.18%,说明小鼠成熟卵母细胞经过冷冻保存复苏后具有受精和胚胎发育的能力。4.冷冻组和新鲜组卵母细胞经过单细胞转录组测序,获得测序结果进行碱基分布、基因区域分布以及与数据库已知基因比对等表明数据质量合格,符合质量需求。新鲜组卵母细胞表达18419个基因,冷冻组表达14564个基因,两组比较表达差异显著的基因有4747个,其中上调表达基因有1426个,下调表达基因有3321个,对差异表达的基因进行了注释,GO分析了167个基因,主要富集于细胞周期、细胞分裂、蛋白质泛素化、细胞应激反应等。KEGG分析,差异基因主要分布在相关代谢通路、RNA转运、细胞周期等,涉及到的信号通路较多,主要有MAPK、Wnt信号通路、转录因子信号通路、Hippo等信号通路。结论:通过玻璃化冷冻方法的改进,提高了小鼠卵母细胞的冷冻复苏存活率;冷冻保存没有显著影响卵母细胞形态和超微结构;冷冻复苏卵母细胞具有受精和发育的能力;冷冻复苏影响了小鼠卵母细胞的基因表达。该研究对于提高小鼠卵母细胞冷冻效率具有一定的作用,为评估小鼠卵母细胞冷冻保存的有效性和安全性提供了实验数据。