第一章Parkin基因在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义目的:检测parkin蛋白在原发性肝细胞癌组织中的表达,并分析其意义。方法:收集永州市中心医院南北院2013年1月至2017年12月经病理组织学检查确诊为原发性肝细胞癌患者的手术标本60例,采用免疫组织化学方法检测60例原发性肝细胞癌患者的癌组织及其癌旁正常肝组织中parkin蛋白的表达情况。结果:1、癌旁正常肝组织中parkin蛋白的阳性表达率明显高于肝癌组织,其差异具有统计学意义(P<0.05)。2、60例肝癌组织中parkin蛋白表达水平与性别、年龄、肿瘤的大小之间差异无明显统计学意义(P均>0.05),与肝癌细胞的分化程度、有无包膜以及有无门静脉癌栓之间的差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:Parkin蛋白在原发性肝细胞癌的癌旁正常肝组织中呈高表达,在肝癌组织中低表达或缺失,表明parkin基因对原发性肝癌的发生发展可能有一定抑制作用。第二章Parkin基因对肝癌HepG2细胞生长增殖的影响目的:1.以质粒为载体将parkin基因(Park2)转染至肝癌HepG2细胞中,探讨parkin基因对肝癌细胞生长增殖、迁移能力及凋亡的影响;2.探讨parkin基因影响肝癌HepG2细胞生长增殖的初步机制,为肝癌的早期诊治及预后评估提供帮助。方法:实验分为3组:1)空白细胞组(Control组:未转染质粒的HepG2细胞组;2)pcDNA3.1-3x Flag组(NC组:转染空质粒的HepG2细胞组);3)Park2 pcDNA3.1-3x Flag组(Park2组:转染parkin基因的HepG2细胞组)。1)以质粒为载体将parkin基因转染至HepG2细胞,采用qRT-PCR方法鉴定HepG2细胞的parkin基因是否转染成功。2)流式细胞术检测三组细胞的凋亡情况。3)MTT实验检测三组细胞的生长、增殖。4)细胞划痕实验检测三组细胞的迁移、侵袭能力。5)Western Blot法检测三组细胞中caspase-8蛋白的表达水平。结果:1、qRT-PCR示Park2组HepG2细胞中parkin mRNA表达量较control组、NC组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2、MTT实验示Park2组细胞的增殖能力低于control组、NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。3、流式细胞术示Park2组HepG2细胞凋亡率高于control组、NC组,具有明显差异(P<0.05)。4、细胞划痕实验结果显示:Park2组细胞的划痕修复率较control组及NC组低,差异有统计学意义(P<0.05)。5.Western Blot实验示:Park2组中caspase-8蛋白表达量明显高于control组、NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Parkin基因可以抑制HepG2细胞的生长增殖、迁移及侵袭,并诱导HepG2细胞凋亡,其抑制HepG2细胞生长增殖的机制可能与上调caspase-8的表达有关。