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[目 的]明确UVB照射皮肤后早期升高的关键炎症因子,探讨其通过直接和间接作用影响黑素合成的机制。[方 法]1.UVB照射C57BL/6后皮肤炎症因子的改变。随机将24只小鼠分为2组,每组12只,分为对照组、UVB照光组。对照组:将小鼠背部毛发剃除,不进行其他处理;UVB照光组:将小鼠背部毛发剃除后,予UVB 120mJ/cm2的剂量照射。分别在UVB照射后10min、20min、30min、1h每个组处死3只小鼠,行RT-qPCR检测皮肤中炎症因子IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、TNF-αmRNA表达水平。随后,在HaCat细胞中检测上述实验中早期升高的炎症因子IL-1β和IL-6,将细胞分为对照组和实验组,对照组不进行任何处理,实验组予UVB 20mJ/cm2 的剂量照射,照射 30min、1h、2h、24h 后行 RT-qPCR 检测IL-1β和IL-6的mRNA表达水平,结果进行统计学分析。2.体外培养小鼠黑素瘤B16细胞中IL-1β直接影响黑素合成的机制。CCK-8法检测浓度为 0pg/ul、2pg/ul、3pg/ul、4pg/ul、5pg/ul 的 IL-1β 对 B16 细胞增殖活性的影响,并筛选出细胞增殖活性最强的IL-1β浓度。使用该浓度的IL-1β作用于B16细胞,NaOH裂解法及L-DOPA氧化法检测黑素含量及酪氨酸酶活性,RT-qPCR 法及 Western Blot 检测TYR、TRP-1、TRP-2和MITF的mRNA 及蛋白水平,结果进行统计学分析。3.体外培养HaCat细胞中IL-1β间接影响黑素合成的机制。通过siIL-1β转染HaCat细胞敲减IL-1β的表达,筛选出转染效率>70%的序列作为实验组,未转染的HaCat细胞为对照组,分别给予20mJ/cm2 UVB照射,24h后RT-qPCR法检测两组细胞中促黑素生成介质COX-2、SCF mRNA表达水平,ELISA检测组胺水平。随后在HaCat细胞培养基中添加人IL-1β(4pg/ul)为实验组,对照组加入正常培养基,24h后,分别检测对照组及实验组COX-2、SCF mRNA及组胺表达水平,结果进行统计学分析。[结 果]1.UVB照射C57BL/6小鼠皮肤后,30min检测到IL-1β和IL-6表达升高(P<0.05),1h IL-10表达升高(P<0.05),IL-1α、IL-17、TNF-α 在检测时间内无明显变化(P>0.05)。UVB照射HaCat细胞后检测IL-故及IL-6的表达时间,IL-1β在1h开始升高(P<0.05),IL-6在2h表达升高(P<0.05),晚于IL-1β。确定IL-1β为UVB照射皮肤后早期关键炎症因子。2.IL-1β在浓度为3,4pg/ul时促进小鼠黑素瘤B16细胞增殖(P<0.05),其中4pg/ul时最明显。使用浓度为4pg/ul的IL-1β处理后,小鼠黑素瘤B16细胞黑素含量增加,酪氨酸酶活性升高,TYR、TRP1、TRP2、MITF的mRNA表达增加(P<0.05),TYR、TRP1蛋白表达增加(P<0.05)。3.(1)敲减IL-1β后的HaCat细胞与对照组相比,UVB照射后COX-2及SCF mRNA表达降低(P<0.05)。(2)含有4pg/ul IL-1 β的实验组与对照组相比,HaCat 细胞中 SCF、COX-2 mRNA 表达升高(P<0.05)。[结 论]1.UVB照射皮肤后可引起IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA表达升高,其中IL-1β为早期升高的关键炎症因子。2.IL-1β可通过TYR/TRP1途径直接促进小鼠黑素瘤B16细胞的黑素合成。3.IL-1β可促进HaCat细胞中促黑素生成介质COX-2、SCF的表达,间接影响黑素的合成。