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研究背景心房颤动(Atrail Fibrillation,AF)是全球心血管疾病领域面临的严峻挑战。近年来,房颤发病率仍呈上升趋势,我国房颤患者数量也在大幅度增加。房颤不仅会引起患者不适,影响心脏功能,还有较高的致残率,带来很大的经济负担。房颤的原因有很多,几乎所有心脏病都可以发生房颤,如瓣膜病、冠心病、心肌病等,其中心脏瓣膜病合并房颤的发生率占房颤患者的12.9%,相较于其他疾病而言发生率较高。尽管研究者从未停止对房颤的发病机制进行研究,但至今尚未完全明确。同样,对瓣膜病房颤的发病机制亦未明确。心房重构是房颤发生和维持的关键环节,瓣膜病房颤患者存在以左心房扩大、心肌超微结构变化及心肌纤维化改变为特征的心房结构变化。但引起心房重构的分子生物学机制是十分复杂的,一直以来都是研究的热点。钙调神经磷酸酶(Calcineurin,CaN)是一种Ca2+/钙调蛋白依赖的蛋白磷酸酶,活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)是 CaN一种的蛋白类底物,已有研究表明CaN-NFAT通路参与瓣膜病房颤的发生。既往也有很多研究发现,NFAT可调节心肌肥厚相关基因的表达,而CaN-NFAT信号通路、GSK3β-NFAT信号通路均通过NFAT参与调控心肌肥厚,两条途径有交叉和联系的部分。糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)作为一种较为常见的、极为保守的丝/苏氨酸磷酸激酶,可使NFAT失活,进而抑制NFAT转移进入细胞核,影响其发挥生物学作用。蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt/PKB)是GSK3β上游一个较为经典的调节分子,可以活化GSK3β,进而参与调控下游的NFAT。所以我们推测Akt、GSK3β蛋白通过影响NFAT亦参与了瓣膜病患者房颤发生。然而,对于这两种酶在瓣膜病房颤患者心肌中的蛋白表达情况尚未见报道,它们所在的Akt-GSK3β-NFAT通路是否参与了瓣膜病房颤及与之的发生关系,目前研究较少。因此,本课题将对此进行研究观察。研究目的通过了解Akt、Gsk3β蛋白在瓣膜病房颤患者的表达情况,探讨Akt-GSK3 β-NFAT通路与瓣膜病房颤的关系。研究方法我们选取了 42例因心脏瓣膜病需行瓣膜病手术的患者,根据收集的病史及术前心电图检查记录分为慢性持续性房颤组(AF组,n=18)和窦性心律组(SR组,n=24)。根据术前心脏彩超结果明确各心腔大小并对患者心功能进行评估。术中取下左心房(左心耳)组织后迅速置于液氮罐转运到-80℃冰箱留待实验。通过免疫组织化学技术观察total Akt、p-Akt(活化形式)、total GSK3β、p-GSK3β(非活化形式)的蛋白表达情况;以磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参,采用Western-blot 技术探究左心房组织中 total Akt、p-Akt、total GSK3β、p-GSK3β的蛋白表达水平。研究结果1.与窦性心律组相比,房颤组心房肌细胞胞浆p-Akt、total GSK3β、p-GSK3β蛋白阳性表达更明显。2.与窦性心律组相比,房颤组心房肌细胞中的p-Akt、total GSK3β、p-GSK3β蛋白水平升高(P<0.05)。两组样本之间total Akt未见明显差异。3.无论免疫组化还是Western-blot技术,均可以看到房颤病人心房肌中活化的Akt表达增多且非活化的GSK3β增多,而total-GSK3β水平也较窦律组的增多,这与理论上total-GSK3β保持恒定不符,分析可能与病人发生房颤的病程不同有关,有研究发现GSK3β的表达水平随着时间推移呈现“山峰样”变化。研究结论结果提示Akt、GSK3β蛋白可能参与了瓣膜病房颤的发生。