论文部分内容阅读
SrGAPs(Slit-Robo GTPase-activating proteins)是Slit-Robo下游信号通路中的一组重要的RhoGAP分子。在哺乳动物中,srGAP家族主要由srGAP1, srGAP2, srGAP3和ARHGAP4四个成员组成。近年来众多的研究显示srGAP1, srGAP2和srGAP3分子在轴突导向、神经元迁移、突起生长和树突形态发生等神经元发育的过程中起到关键的作用。在SVZ/VZ等神经发生的区域,srGAP家族各成员的mRNA均呈现高表达,提示srGAPs可能作为重要的调节蛋白参与调控神经元早期的发育—神经元分化。我们实验室以往的研究还发现,在神经元发育过程中,srGAP家族各成员存在细胞浆—细胞核转位的现象。然而,srGAPs在细胞核中所扮演的角色仍未被充分揭示。本课题主要探讨细胞核定位的srGAPs在神经元分化过程中潜在的功能。我们通过western blotting等手段证实了srGAP家族各成员主要分布于中枢神经系统,且在P1至P14阶段的大鼠大脑皮层中处于高水平表达。在体外培养的大脑皮层神经元和Neuro2A细胞中,srGAP3分子与染色质重塑复合物的核心成员Brg1分子共定位于细胞核。免疫共沉淀的结果显示,Neuro2A细胞中内源表达的srGAP3与Brg1相结合。SrGAP3在VPA诱导Neuro2A细胞神经元分化的过程中起到阴性调控的作用,进一步深入研究则显示srGAP3的抑制作用与Rac1的活性密切相关。此外,我们还发现过表达srGAP3会导致Neuro2A细胞中GAP-43表达水平的显著下降。以上结果表明,细胞核定位的srGAPs分子在神经元分化过程中发挥着重要的调节作用。