肾综合征出血热（HFRS）是由汉坦病毒引起的一种危害极大的急性病毒性传染病，在我国的危害尤为严重，目前尚无特异有效的治疗方法。鼠源性单克隆抗体（mAb）在病毒性疾病的治疗上已有应用，但由于用杂交瘤技术制备人源性mAb仍存在很多困难，而鼠源性mAb存在人抗鼠抗体（HAMA）应答，可能会影响其治疗效果，甚至引起变态反应，危及生命。因此，用基因工程方法改造鼠源性mAb，对其进行“人源化”改造，减少鼠源性mAb的免疫原性，对进一步利用鼠源性mAb治疗疾病具有重要意义。 本研究在本室已克隆抗汉坦病毒mAb 1A8单链抗体（ScFv）的基础上，构建了鼠/人嵌合Fab表达载体，并鉴定了表达产物的免疫学活性。首先用PCR扩增人重链恒定区1（CH1）基因和轻链恒定区（C_k）基因，并用引物点突变法使人CH1基因中BstEⅡ酶切位点发生突变，除去BstEⅡ酶切位点，以便于克隆。然后分别将mAb 1A8 V_H基因和突变的人CH1基因连接、V_L基因和人C_k基因连接，分别构建了鼠/人嵌合重链Fd基因和轻 第四军医大学硕土学位论文链基因，并克隆入pComb3，构建了鼠／人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体IASFab／pComb3。用 Spe和 Nhe切除编码噬菌体衣壳蛋白 gill基因后使载体自连，获得了可溶性 Fab表达载体 slASFab／pComb3。酶切鉴定及序列分析结果均表明，人 CHI基因中 BslE 11酶切位点已被突变，并与 Ilb％bIAS V。基因连接为鼠／人嵌合Fd基因；IA8 V。也与人C。基因正确连接，构成鼠／人嵌合轻链基因，表达载体均构建正确。 将上述表达载体分别进行表达及检测。ELISA间接夹心法的结果表明，在噬菌体表面表达的Fab和可溶性表达的Fab均可与汉坦病毒核蛋白 （NP）抗原结合；可溶性Fab表达产物主要存在于细菌培养上清和细菌裂解液中。同时 ELISA阻断试验结果也表明鼠源性 mAb AS可明显阻断噬菌体表面表达的Fab与NP抗原的结合，表明鼠／人嵌合Fab抗体与IllilbIAS识别相同的抗原结合位点。Western blot结果表明可溶性 Fab表达产物可与NP抗原特异结合。用ELISA阻断法检测可溶性Fab抗体的表观亲和力，约为 5 XIO“molo 本研究获得了鼠／人嵌合Fab抗体基因，并分别表达了可与汉坦病毒NP抗原特异结合的噬菌体Fab抗体及可溶性Fab抗体。在克隆过程中所构建的多种载体可用于其它Fab抗体的构建及表达。