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失血性休克引起的免疫功能抑制,降低机体抗感染能力,是失血性休克发展为不可逆休克的重要因素之一。CD4~+T淋巴细胞功能低下在这一过程中具有重要作用。CD4~+T淋巴细胞具有经典雌激素受体(ER)α、ERβ和膜受体G蛋白偶联受体30(GPR30)。创伤、休克和脓毒症时存在明显的性别差异,同时,17β-雌二醇(E2)治疗失血性休克后雄性动物T细胞减弱了细胞因子分泌和细胞损伤等变化,相关机制有待进一步研究。失血性休克引起了实质细胞发生内质网应激(ERS),并引起器官损伤。但是,ERS是否参与了E2改善失血性休克后的脾CD4~+T细胞功能的作用,还不清楚。为此,在本研究中,我们假设E2治疗失血性休克后脾组织损伤以及恢复脾CD4~+T细胞增殖和细胞因子产生是通过ERs介导的,而E2的有益作用是通过降低ERS实现的。156只雄性Wistar大鼠经历创伤(腹部正中线5 cm切口)失血(平均血压40mmHg,持续90分钟),然后进行液体复苏。复苏时,皮下分别给予E2(2 mg/kg)、ER-α激动剂丙基吡唑三醇(PPT,5μg/kg)、ER-β激动剂二芳基丙腈(DPN,5μg/kg)、G蛋白-偶联受体30(GPR30)激动剂G-1(5μg/kg)、E2+ER拮抗剂ICI 182 780(5μg/kg)、E2+GPR30拮抗剂G15(5μg/kg)、ERS特异激动剂衣霉素(TM,2 mg/kg)、E2+TM、PPT+TM、DPN+TM、G-1+TM、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA,5μg/kg)或等体积在复苏开始时皮下注射溶媒(100%DMSO,20μl/kg)。3小时后,处死大鼠,取出大鼠脾脏。应用免疫磁珠法分离脾CD4~+T细胞,在ConA体外刺激48 h后,CCK-8法检测CD4~+T细胞增殖;ELISA法检测CD4~+T细胞培养基上清中细胞因子IL-2、IL4和TIPE2水平;HE染色后观察脾组织组织病理学变化;Western Blot法检测组织中ERS标志蛋白GRP78、ATF6的表达。结果表明,失血性休克后,CD4~+T细胞增殖能力明显下降;E2或PPT的施用明显减轻了失血性休克对大鼠脾脏CD4~+T细胞增殖能力的抑制,但DPN和G-1对脾CD4~+T细胞增殖能力的无影响;ICI 182 780或G15可阻断E2对脾脏CD4~+T细胞增殖能力的影响;失血性休克后,4-PBA明显恢复了大鼠脾脏CD4~+T细胞增殖能力,而TM明显降低了假手术组CD4~+T细胞增殖能力;TM的联合施用,废除了Shock+E2组与Shock+PPT组CD4~+T细胞增殖能力的有利影响。失血性休克后,大鼠脾脏CD4~+T细胞分泌IL-2、IL-4、TIPE2的水平明显降低;E2或PPT明显恢复了失血性休克大鼠脾脏CD4~+T细胞IL-2、IL-4、TIPE2的分泌能力,而DPN和G-1处理无明显作用;ICI 182780或G15分别阻断了E2对脾脏CD4~+T细胞产生分泌IL-2、IL-4、TIPE2的能力;失血性休克后,4-PBA明显恢复了大鼠脾脏CD4~+T细胞分泌IL-2、IL-4、TIPE2的能力,而TM明显降低了假手术组CD4~+T细胞产生细胞因子的能力;TM的联合施用,废除了Shock+E2组与Shock+PPT组CD4~+T细胞分泌IL-2、IL-4、TIPE2的能力的有利影响。假手术组,脾脏组织结构基本正常,白髓和红髓边缘区清晰;失血性休克后,脾组织白髓的轮廓消失,出现不规则形态和组织学评分明显升高;在失血性休克后,施用E2、PPT或4-PBA,使大鼠脾组织白髓轮廓基本恢复正常,降低了组织学评分,DPN和G-1对失血性休克后的白髓和炎症细胞无明显影响;ICI 182 780和G15可阻断E2对脾组织有益作用;E2+TM或PPT+TM可阻断E2或PPT对脾组织的影响。此外,单独应用TM对假手术大鼠脾组织有损伤作用,显著升高了脾脏组织学评分。失血性休克后,脾脏ERS标志蛋白GRP78和ERS通路标志蛋白ATF6显著上调;E2与PPT治疗分别明显降低了失血性休克的大鼠脾脏GRP78和ATF6的过表达;ICI 182 780与G15均分别废除了E2的治疗作用,DPN与G-1并无明显作用;失血性休克后,4-PBA组明显降低了失血性休克的大鼠脾脏GRP78和ATF6的表达;假手术组,施用TM明显增加了大鼠脾脏GRP78和ATF6的表达。同时,TM废除了Shock+E2组与Shock+PPT组的治疗效果。以上结果表明,E2改善创伤失血性休克后CD4~+T细胞免疫功能通过ER-α和部分GPR30起作用的,这些有益作用是通过减弱ERS来实现的。研究结果初步明确了E2改善失血性休克免疫功能的机制,为防治失血性休克的免疫功能障碍提供了新的资料。