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背景及目的类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,R.A)是一种全身性的自身免疫性疾病,其发病主要是由于机体免疫系统功能紊乱,打破了机体的免疫稳态,引起以关节为主的靶器官发生损害及功能障碍[1]。未得到合理有效治疗的RA患者全身多处关节骨质便会遭到破坏并逐渐丧失其功能,甚至还会造成人体肺脏、肾脏、心脏等多种功能器官的损害。所以,提高RA的诊疗水平,做到尽早发现、尽早干预,提高患者的生活质量,是一个全社会亟待解决的重大难题。一直以来,T淋巴细胞在机体内被过渡激活是公认的RA的主要致病机制[2,3]。被过渡激活的T细胞常常在RA患者体内异常表达,导致免疫细胞的数量和/或比例也随之发生改变。目前有关RA发病的众多机体免疫细胞中,CD4+T细胞被认为是研究最多且公认度最高的细胞。RA在发病时,CD4+T细胞中包含的Th1和Th17型细胞高度活化[4],并且产生了像TNF-α、IFN-γ、IL-17等细胞因子,从而引发炎症状态。虽然CD4+T细胞在RA发病机制中占据重要位置,但其它免疫细胞的参与也是不可或缺的,随着研究的不断深入,CD8+T细胞也逐渐引起大家的关注。有研究显示,CD8+T细胞也可能是参与RA发病过程的重要一员[5,6],有研究人员在RA患者的血液以及关节液中发现了升高的CD8+CD25+T细胞,其在幼年型RA患者的血液及滑膜液中明显升高,并且经过常规的有效治疗后,患者血液及滑膜液中的CD8+CD25+T细胞又呈明显下降趋势。综合以上研究结果可以看出,CD8+T细胞可能在RA的免疫调节过程中发挥了一定作用。本实验主要运用流式细胞技术,测定了 RA患者外周血PBMC中T细胞亚群的表达,分析CD8+CD25+T细胞与RA临床及相关实验室检查的相关性,探讨其在RA发病中的可能临床意义,对CD8+CD25+T在RA中的诊断价值进行评估。方法1.研究对象:本实验收集了 2018年5月至12月期间来自北大人民医院的38例RA患者的相关资料及外周血。所选患者的就诊症状均符合美国风湿病学会(ACR)的“类风湿关节炎”诊断标准[7,8],均表现出不同程度的膝、腕、踝等处关节肿胀、疼痛、或活动受限。此外,本实验增加20例年龄性别匹配的健康人外周血作为对照。通过比较实验组和健康对照组(HC)CD8+CD25+T细胞的表达差异,分析CD8+CD25+T与RA临床表现及实验室检查的相关性,并探讨其在RA发病中的临床意义,并对CD8+CD25+T对RA的诊断价值进行评估。2.分离PBMCs:首先抽取RA患者2ml静脉血于标准的EDTA-NA2抗凝管内,使用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞,在分离出的淋巴细胞中加入生理盐水或者PBS缓冲液稀释备用。3.细胞染色:先用PBS将稀释后的淋巴细胞洗涤2次,在细胞悬液中依次加入荧光素标记的单抗染色后避光放置30min,然后再次用PBS洗掉细胞,最后加入标准浓度的多聚甲醛固定细胞备用上机。4.统计分析:实验数据的统计分析是用SPSS 20.0软件完成,作图是用GraphPad Prism6软件完成。本实验的计量资料是以均数±标准差的形式表示;组间比较是通过t检验、卡方检验进行;CD8+CD25+T细胞和临床指标的性关性采用Spearman等级相关系数分析;P<0.05被认为有统计学意义。结果1.RA患者外周血CD8+CD25+T细胞的表达水平明显高于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.RA 患者外周血 CD8+CD25+T 细胞与 ESR(r=0.352,P=0.030)、CCP(r=0.312,P=0.047)、DAS28(r=0.330,P=0.043)呈现明显正相关(P<0.05);和C3(r=-0.354,P-0.046)、C4(r=-0.440,P=0.010)呈明显负相关(P<0.05),和其他指标 CRP、RF、ASO、D-dimer、HRF-IgG、IgG、IgA、IgM、WBC 等无明显相关。3.在实验室指标ESR、CCP、CRP、C3、C4、DAS28升高的患者中,其CD8+CD25+T细胞的百分比明显高于指标正常的患者(均P<0.05),而其他实验室指标在升高组和正常组患者中CD8+CD25+T细胞的表达无明显差别。4.RA患者外周血CD8+CD25+T细胞和疾病活动度明显相关,在低疾病活动度组和高疾病活动度组之间差异具有统计学意义(P<0.05),而在其它组之间差异无统计学意义。结论1.较健康对照组相比,类风湿关节炎(RA)患者外周血CD8+CD25+T细胞显著升高且与实验室指标和疾病活动度明显相关,其可能在类风湿关节炎的发病过程中起重要作用。2.CD8+CD25+T细胞群可能做为用于评估疾病是否处于活动期的指标之一。