TRPV1介导温灸对AA模型小鼠抗炎效应的作用研究

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背景:炎症是机体受到外界微生物侵害或损伤时,产生的一种局部的、保护性的生理反应。炎症反应的强度是决定了不同疾病的发生:反应不足导致免疫缺陷,会引起感染和癌症;反应过度则会引发类风湿性关节炎、克罗恩氏病、动脉粥样硬化、糖尿病、阿尔茨默氏病等疾病。因此炎症反应被认为是大多数重要疾病的共同通路。大量的艾灸临床研究已经表明艾灸依靠其温热刺激发挥抗炎效应。瞬时受体电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid Subtype 1, TRPV1)受体是非选择性阳离子通道,研究发现TRPV1在炎症发展过程中起着重要的作用,应用TRPV1激动剂具有抗炎的作用。TRPV1作为温度感受器,当温度高于43℃的时候TRPV1就会被激活,大于43℃的热刺激处于临床上艾灸施灸局部皮肤温度的范围中,与TRPV1激活的温度阈值相当。目的:探讨TRPV1在温灸对佐剂型关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)模型小鼠抗炎效应的作用。方法:实验一:30只KM小鼠随机分为空白组、模型组、温灸组各10只,除空白组外,在每只小鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂20μL建立佐剂型关节炎模型。从造模成功当天开始,温灸组以5mm*200mm的特制艾条在脊柱L5、L6区域悬灸20分钟,保持艾条距离皮肤12±2mm,使温度维持在44±1℃。每天1次,总共7天。期间空白组、模型组均不作任何处理。测量并记录实验第1天、实验第2天、实验第4天、实验第6天、实验第8天各组的右后足跖容积。所有治疗结束后取材,ELISA方法检测血清IL-1β、TNF-α含量。实验二:60只KM小鼠随机分为空白组、模型组、辣椒素组、辣椒平组、温灸组和温灸±辣椒平组(以下简称温平组)各10只,除空白组外,在每只小鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂20μL建立佐剂型关节炎模型。从造模成功当天开始,辣椒素组每只小鼠在脊柱L5、L6区域皮下注射辣椒素0.1ml/10g。辣椒平组每只小鼠腹腔注射辣椒平0.1ml/10g。温平组每只小鼠先腹腔注射辣椒平0.1ml/10g,15分钟后再以特制艾条在脊柱L5、L6区域悬灸20分钟,保持艾条距离皮肤12±2mm,使温度维持在44±1℃。每天1次,总共7天。空白组、模型组、温灸组处理同实验一。检测指标和方法同实验一。实验三:16只野生型C57BL/6小鼠随机分为WT模型组和WT温灸组各8只;14只TRPV1基因敲除小鼠随机分为KO模型组和KO温灸组各7只。在每只小鼠右后足跖皮内注射完全弗氏佐剂20μL建立佐剂型关节炎模型。从造模成功当天开始,WT温灸组和KO温灸组以5mm*200mm的特制艾条在脊柱L5、L6区域悬灸20分钟,保持艾条距离皮肤12±2mm,使温度维持在44±1℃。每天1次,总共7天。期间WT模型组和KO模型组均不作任何处理。检测指标和方法同实验一。结果:1.与空白组比较,模型组的足跖肿胀度显著升高(P<0.01),表明佐剂型关节炎模型造模成功。2.与模型组比较,辣椒素组、辣椒平组和温灸组对足跖肿胀度、血清IL-1β、TNF-α的含量均有明显降低的作用(P<0.01),表明三者均有抑制炎症的作用。3与温灸组比较,加入辣椒平的预处理后,温平组的足跖肿胀度、血清IL-1β、TNF-α的含量高于温灸组(P<0.05),这表明辣椒平可能部分拮抗温灸抑制炎症的效应。4.与WT模型组比较,WT温灸组的足跖肿胀度、血清IL-1β、TNF-α的含量均明显下降(P<0.01);与KO模型组比较,KO温灸组的足跖肿胀度、血清IL-1β、TNF-α的含量均无明显下降(P>0.05)。结论:TRPV1在温灸抑制炎症过程中发挥重要作用,缺少TRPV1的介导,温灸可能失去抗炎效应。
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